人乙酰肝素酶(HPA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板预先包被人HPA特异性抗体，加入标准品与待测组织、血清样本，样本中的HPA抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂蛋白，加入酶标记HPA检测抗体形成夹心免疫复合物，充分洗涤后进行酶促显色反应，终止显色后检测吸光度，依据标准曲线定量检测样本中HPA的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测 0.07ng/mL

检测范围：0.25~16ng/mL

反应时间：样本结合 55min，酶二抗 55min，避光显色 18min，总 128min

保存条件：2~8℃避光，标准品干粉 - 20℃冻存避免受潮

显色系统：A+B 混合 TMB 显色体系

检测波长：450nm 检测，630nm 校正孔底本底

标准曲线绘制：八点梯度稀释，线性回归绘制标准曲线

注意事项：组织裂解样本需离心去除细胞碎片，防止非特异性吸附
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

组织上清 / 血清稀释：待测样本稀释液稀释涡旋混匀，室温静置 11min；试剂室温平衡 32min。

微孔加样密封孵育：设置对照孔，加入标准品、样本与酶标记工作液，覆膜封口，37℃孵育 68min。

洗板除杂：洗涤液浸泡微孔 40s，洗板 5 次，彻底拍干微孔洗涤废液。

底物显色：加入显色液避光混匀，37℃显色 17min。

终止液终止：准时添加终止液摇匀酶标板。

仪器读取 OD：450nm 检测吸光度数值并归档。

数据分析：标准曲线拟合计算样本 HPA 蛋白浓度。