人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板预先固定人CPAF特异性抗体，加入标准品和待测临床样本，样本中的CPAF抗原与固相抗体特异性结合，洗涤清除非特异性杂质，加入酶标记CPAF检测抗体构建夹心免疫复合物，洗涤纯化体系后进行酶促显色反应，终止显色后检测吸光度，通过标准曲线回归方程定量检测样本中CPAF的含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 15pg/mL

检测范围：60~3840pg/mL

反应时间：样本室温孵育 90min，二抗 50min，避光显色 20min，总 160min

保存条件：整套试剂 2~8℃，包被板铝箔袋开封后尽快使用

显色系统：双组份 TMB 避光显色体系

检测波长：450nm 测定吸光度

标准曲线绘制：六点标准浓度，直线回归构建标准曲线

注意事项：泌尿生殖道分泌物样本需充分稀释，杂质易造成非特异吸附
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

体液样本稀释制备：待测分泌物 / 血清样本稀释混匀，室温静置 11min；试剂盒室温平衡 33min。

加样密封孵育：各微孔加入标准品、待测样本与酶标记抗体液，覆膜封口，37℃孵育 68min。

洗板去除非特异结合：洗涤液浸泡微孔 45s，洗板 5 次，彻底拍干微孔废液。

避光底物显色：添加显色混合液，水平震荡混匀，37℃避光显色 17min。

终止显色反应：加入终止液关停显色体系并摇匀。

仪器读数：450nm 检测各孔 OD 值对应编号存档。

判读与定量：设定临界值判定阴阳性，标准曲线定量 CPAF 浓度。