人延伸蛋白A(EloA)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，微孔板预先包被抗人EloA特异性抗体，作为固相捕获位点，加入标准品与待测样本后，样本中的EloA抗原特异性结合至固相抗体，洗涤去除未结合杂蛋白，加入酶标记EloA检测抗体形成稳定的免疫夹心复合物，洗涤游离酶标抗体后进行底物显色，终止反应后检测吸光度，依据标准曲线定量测定样本中EloA的含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.07ng/mL

检测范围：0.25~16ng/mL

反应时间：37℃结合 55min，酶标二抗 60min，显色 19min，总 134min

保存条件：未拆封 2~8℃，标准品干粉 - 20℃长期保存

显色系统：单组份稳定 TMB 底物

检测波长：450nm 单一波长读数

标准曲线绘制：八点倍比稀释，四参数 Logistic 绘制曲线

注意事项：操作过程避免手触碰微孔板底部，影响酶标仪读数
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

细胞上清 / 血清样本稀释：稀释液配比稀释样本，颠倒混匀，室温静置 12min；试剂盒组分室温平衡 35min。

共加样封板孵育：各孔加入标准品、待测样本与酶标记工作液，密封酶标板，37℃孵育 72min。

洗板操作：洗涤液浸泡微孔 40s，洗板 5 次，吸水纸倒扣拍干微孔。

避光显色：加入显色双液混匀，37℃避光显色 16min。

终止显色：添加终止液终止酶促显色并混匀。

酶标仪测值：450nm 检测每孔 OD 吸光度并记录。

浓度换算：标准曲线带入样本 OD 值，折算稀释倍数得到 EloA 浓度。