人血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先包被人PBP/CXCL7特异性单克隆抗体，作为固相捕获载体，加入标准品与待测样本后，样本中的PBP抗原特异性结合至固相抗体，洗涤去除未结合物质，加入酶标记检测抗体形成夹心免疫复合物，洗涤去除游离酶标抗体后，加入显色底物显色，终止反应后检测吸光度，依据标准曲线定量测定样本中PBP/CXCL7的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 0.06ng/mL

检测范围：0.2~12.8ng/mL

反应时间：样本孵育 60min，二抗 45min，避光显色 17min，总 122min

保存条件：试剂盒 2~8℃，开封板条放入自封袋加干燥剂保存

显色系统：避光稳定型 TMB 底物

检测波长：450nm 为主波长，650nm 参比

标准曲线绘制：六组梯度浓度，四参数 Logistic 回归绘图

注意事项：样本离心转速不可过低，血小板破裂释放蛋白干扰结果
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

富血小板血浆样本稀释：样本稀释液稀释待测血浆，颠倒混匀，室温静置 10min；试剂室温平衡 31min。

一步加样孵育：设置对照孔，加入标准品、样本及酶结合试剂，密封酶标板 37℃孵育 66min。

循环洗板：洗涤液浸泡 40s，洗板 5 次，倒扣酶标板拍干废液。

底物显色：加入显色液避光混匀，37℃显色 16min。

终止反应：加入终止液终止显色并摇匀。

酶标仪读数：450nm 波长检测 OD 值归档数据。

定量计算：拟合标准曲线换算稀释倍数得到 PBP 浓度。