人血栓素A2(TX-A2)ELISA试剂盒

本试剂盒依托竞争法ELISA检测原理，微孔板包被有TX-A2特异性固相抗原，加入待测样本和梯度标准品，同时加入酶标记特异性抗体，样本中的TX-A2与固相抗原竞争结合酶标抗体，孵育完成免疫结合反应后，洗涤去除未结合物质，加入显色底物进行酶促显色，终止反应后检测吸光度，吸光度数值与样本中TX-A2浓度呈负相关，通过标准曲线可精准定量样本中TX-A2的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低可测 12pg/mL

检测范围：50~3200pg/mL

反应时间：竞争法孵育 65min，酶结合物 35min，显色 19min，总 119min

保存条件：2~8℃冷藏，工作液现配现用不可隔夜留存

显色系统：A+B 混合 TMB 显色，硫酸终止

检测波长：450nm 主波长，630nm 参比

标准曲线绘制：竞争抑制法，四参数拟合标准曲线

注意事项：血栓素极易降解，样本需低温抗凝并立即检测
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

抗凝血浆样本稀释：采集抗凝血浆快速稀释，混匀室温静置 5min；试剂盒试剂室温复温 30min。

加样封板孵育：各孔加入标准品、待测血浆与酶结合液，封板 37℃孵育 60min。

洗板操作：弃净孔内液体，洗涤液浸泡 30s，洗板 5 次，拍干微孔。

底物显色：加入显色 A、B 液，避光混匀，37℃显色 14min。

终止液终止反应：准时加终止液混匀体系。

酶标仪测 OD：450nm 检测吸光度数值并记录。

数据换算：依托标准曲线计算 TX-A2 样本实际浓度。