人重组激活基因1(RAG-1)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA核心原理，酶标板微孔包被抗人重组激活基因1特异性抗体，加入标准品和待测样本后，样本中的RAG-1蛋白抗原与固相捕获抗体特异性结合，孵育洗涤后加入HRP标记的RAG-1检测抗体，形成完整免疫夹心复合物，经显色、终止反应后检测吸光度，依据标准曲线线性关系定量检测样本中RAG-1的表达含量。
基本参数‌：

产品名称：人重组激活基因1(RAG-1)ELISA试剂盒

英文名称：RAG-1 ELISA Kit
货号：Y-E2970

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.22pg/mL

检测范围：0.44pg/mL - 28.16pg/mL

反应时间：抗原捕获 48min，酶结合 38min，显色 18min

保存条件：试剂盒 2-8℃冷藏，不可冷冻结冰

显色系统：HRP 催化 TMB 显色，硫酸终止反应

检测波长：450nm 参比 630nm

标准曲线绘制：双复孔取平均值，采用非线性拟合绘制标准曲线

注意事项：淋巴细胞样本新鲜制备，RAG 蛋白半衰期短，离体后快速降解
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 32min，倍比稀释 RAG-1 标准品，淋巴细胞核裂解上清稀释待测，划分酶标板孔位组别。

逐孔更换枪头加样，空白孔加稀释缓冲液，标准孔加梯度 RAG-1 标准液，样本孔加入裂解待测样本。

一步法直接加入酶结合抗体工作液至所有微孔，手动摇晃酶标板混匀反应液体。

封板封口后 37℃湿盒避光孵育 70min，维持孵育湿度防止液体挥发。

撕去封板倾倒废液，洗板液浸泡每孔 32s，连续洗板 5 次并彻底拍干微孔。

避光加入显色底物混合液，室温避光显色 18min，标准品梯度显色后终止。

终止液终止反应，450nm 读取吸光值，标准曲线计算 RAG-1 蛋白表达量。
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