人血浆纤维连接蛋白(pFN)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，将纯化的人pFN特异性单克隆抗体包被于酶标板微孔，作为固相捕获位点，加入标准品和待测血浆样本后，样本中的pFN抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合蛋白与杂质，加入酶标记的pFN检测抗体形成夹心免疫复合物，再次洗涤去除游离酶标抗体，加入显色底物进行显色反应，终止显色后检测各孔吸光度，吸光度数值与样本中pFN浓度正相关，通过标准曲线计算得出样本中pFN的精准含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低可测 0.2μg/mL

检测范围：1~64μg/mL

反应时间：样本室温孵育 90min，酶标抗体 45min，显色 15min，总 150min

保存条件：试剂盒 2~8℃，已稀释工作液不可冷藏，需现配现用

显色系统：单组分稳定型 TMB 显色液

检测波长：450nm 读数，620nm 扣除背景

标准曲线绘制：7 个梯度浓度，Logistic 四参数回归绘制曲线

注意事项：血浆样本抗凝剂优先选用 EDTA，肝素抗凝易产生非特异性结合
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

血浆样本处理：分离无溶血抗凝血浆样本，用样本稀释液稀释待测血浆，颠倒混匀 10 次，室温放置 5min；试剂室温复温 30min。

加样共孵育：空白、标准、样本孔分别加对应液体与酶结合试剂，覆膜封板，37℃孵育 58min。

洗板流程：弃去孔内液体，洗涤液加满微孔浸泡 30s，洗板 5 次，拍干微孔残留洗液。

显色底物添加：加入显色 A、B 液，震荡混匀，避光 37℃显色 15min。

终止反应：加入终止液终止显色反应，轻摇酶标板混匀。

酶标仪测值：450nm 波长读取各孔 OD 数值，按编号记录。

结果计算：拟合标准曲线计算样本稀释浓度，换算稀释系数得到 pFN 血浆浓度，整理实验数据。