人血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie1)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先包被纯化的抗人Tie1特异性抗体，能够特异性捕获标准品及待测样本中的Tie1抗原，充分孵育结合后洗涤除杂，加入HRP标记的Tie1检测抗体形成稳定免疫复合物，TMB底物显色终止后检测各孔吸光度，结合标准曲线回归方程，精准定量检测样本中Tie1的含量。
产品参数：

‌灵敏度：0.08ng/mL

检测范围：0.16-10.24ng/mL

反应时间：样本温育 77min，酶标二抗 47min，显色 11min

保存条件：整套试剂 2-8℃冷藏，开封后 1 个月内用完

显色系统：预混即用显色液，无需现场配制

检测波长：450nm 单波长检测

标准曲线绘制：浓度与 OD 值做线性回归生成标准曲线

注意事项：血管组织样本去除血凝块，血块内凝血因子会非特异性吸附 Tie1 受体造成假阳性结果
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 33min，配置一步法双抗体一步式酶工作液，划分空白、标准、组织样本孔。

每孔先加酶混合液 60μL，标品孔加梯度 Tie1 标准液 40μL，样品孔加血管组织匀浆 40μL，空白孔加稀释液 40μL。

覆膜密封，37℃孵育 58min，倾倒废液，洗板 4 次，每次浸泡 25s，拍干孔内残留洗液。

每孔加入 TMB 显色底物 100μL 摇晃混匀。

室温避光显色 13min。

快速加入终止液 50μL 终止反应。

450nm 测定 OD 值，计算 Tie1 受体蛋白浓度。