人血管紧张素Ⅱ受体1(ANGⅡR-1)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫检测原理，微孔板预先包被抗人ANGⅡR-1特异性抗体，加入梯度标准品和待测样本，样本中的ANGⅡR-1抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗涤去除非结合组分，加入HRP标记的配对检测抗体形成夹心复合物，底物显色终止后测定OD值，结合标准曲线精准测算样本中ANGⅡR-1的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：0.12ng/mL

检测范围：0.25-16ng/mL

反应时间：37℃孵育 79min，酶标抗体 50min，显色 13min

保存条件：试剂盒 2-8℃，膜蛋白标准品 - 20℃冻存

显色系统：增强型显色底物降低基质干扰

检测波长：450nm 单波长读数

标准曲线绘制：线性回归拟合标准曲线定量受体蛋白含量

注意事项：细胞膜提取避免过度超声，超声破碎会破坏受体蛋白构象
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温放置 33min 复温，配置一步法酶结合复合物液，划分实验孔组别。

每孔先加酶混合液 60μL，标品孔加梯度 ANGⅡR-1 标准品 40μL，样品孔加血管内皮裂解液 40μL，空白孔加稀释液 40μL。

封板 37℃孵育 59min，甩净废液，洗板 4 次，每次浸泡 26s，倒扣拍干孔板。

每孔加入 TMB 显色底物 100μL 混匀。

室温避光显色 12min。

滴加终止液 50μL 终止酶促显色。

450nm 测吸光度，拟合曲线定量受体蛋白含量。