人腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫检测原理，将纯化的抗人ABCA1特异性抗体包被于96孔微孔板，加入梯度标准品和待测样本，样本中的ABCA1抗原与固相抗体特异性结合，孵育完成反应后洗涤去除未结合组分，加入HRP标记的配对检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，底物显色终止后检测吸光度，结合标准曲线精准测算样本中ABCA1的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：0.13ng/mL

检测范围：0.25-16ng/mL

反应时间：孵育 88min，二抗 56min，显色 16min

保存条件：2～8℃避光，微孔板严禁冷冻

显色系统：TMB 底物显色，硫酸终止变色

检测波长：450nm 主波长

标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线换算蛋白浓度

注意事项：细胞膜蛋白提取需添加蛋白酶抑制剂，防止 ABCA1 蛋白水解
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 29min，配制一步法酶标记抗体工作液，标记空白、标准、样品孔。

每孔先加注酶液 60μL，标品孔加梯度 ABCA1 标准品 40μL，样品孔加细胞裂解上清 40μL，空白孔补稀释液 40μL。

覆膜密封，37℃孵育 64min，倒掉废液，洗板 4 次，每次浸泡 25s，倒扣拍干。

每孔加入 TMB 显色底物 100μL 混匀。

室温避光显色 14min。

加入终止液 50μL 终止反应。

450nm 读取吸光度，计算 ABCA1 表达量。