人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA核心原理，将人CCL28特异性捕获抗体包被于酶标板微孔，加入待测样本与标准品后，样本中的粘膜相关上皮趋化因子与固相抗体特异性结合，孵育洗涤后加入酶标记检测抗体，构建固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物，经显色、终止反应后检测OD值，根据数值与抗原浓度的正相关关系，定量测定样本中CCL28的表达水平。
基本参数‌：

产品名称：人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA试剂盒

英文名称：MEC   Elisa Kit
货号：Y-E091

规格：48T/96T

灵敏度：最小可测 0.07pg/mL

检测范围：0.14pg/mL - 9pg/mL

反应时间：一抗结合 35min，酶标记物 35min，避光显色 11min

保存条件：全套试剂 2～8℃避光密封保存

显色系统：单组份稳定底物 TMB

检测波长：450nm 读数

标准曲线绘制：线性回归法绘制曲线，适合中低浓度样本批量检测

注意事项：黏膜拭子洗脱液需充分稀释，避免基质效应抑制显色
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂室温回温 29min，梯度稀释 CCL28 标准品，粘膜组织匀浆上清稀释制备待测液，标记酶标板微孔分组。

空白孔加稀释缓冲液，标准孔依次添加梯度标准品，样本孔加入待测匀浆上清，统一每孔加样体积。

一步法直接添加酶标记抗体工作液至所有微孔，手动摇晃酶标板混匀。

封板封口后 37℃恒温避光孵育 63min，酶标板单层放置不可堆叠。

倒出孔内液体，洗板 4 次，每次浸泡 30s，吸水纸吸干微孔残留洗液。

避光滴加显色 AB 底物液，37℃避光显色 15min，观察梯度显色效果。

终止液终止反应，450nm 读取吸光值，依托标准曲线计算 CCL28 含量。
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