人纤溶酶/纤维蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，将纯化的人PL/Fbn特异性抗体包被于96孔微孔板，作为固相捕获载体，加入标准品与待测样本后，样本中的PL/Fbn抗原与固相抗体特异性结合，洗去未结合杂质后加入HRP标记的检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，经底物显色、终止反应后，通过酶标仪检测OD值，依据标准曲线计算得出待测样本中PL/Fbn的浓度含量。
产品参数：

‌灵敏度：0.12ng/mL

检测范围：0.25-16ng/mL

反应时间：室温结合 90min，酶结合物 50min，显色 16min

保存条件：2-8℃避光保存，显色液严禁接触金属器皿

显色系统：TMB 底物显色，硫酸终止反应由蓝变黄

检测波长：450nm 读取吸光度

标准曲线绘制：四参数 Logistic 回归绘制标准曲线计算样本浓度

注意事项：样本采集后立即加抑肽酶防止纤溶酶自发降解，避免反复冻融样本
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 22min，稀释一步法酶标一抗工作液，区分各类实验孔。

所有孔先加酶标记液 50μL，标准品孔加 PL/Fbn 梯度标准液 50μL，待测孔加样本 50μL，空白孔加缓冲液。

封板 37℃孵育 75min，弃液后洗板 6 次，每次浸泡 32s，拍干孔内液体。

依次添加显色 A、B 液各 50μL，混匀处理。

避光 37℃显色 20min，严控显色时间。

加入终止液 50μL 终止酶促反应。

酶标仪 450nm 读数，计算样本 PL/Fbn 浓度。