ATCC 35218大肠埃希菌β-内酰胺酶试验

导读： β-内酰胺酶抑制剂复合药物（如阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦）是临床抗感染治疗的重要武器，而ATCC 35218作为产TEM-1型β-内酰胺酶的大肠埃希菌标准菌株，是验证这类药物药敏试验可靠性的关键质控菌。本文详解该菌株的耐药机制特征及其在药敏质控中的具体应用。

菌株基本信息

ATCC 35218是一株携带blaTEM-1基因的大肠埃希菌，可组成型表达TEM-1型β-内酰胺酶。该酶属于Ambler A类β-内酰胺酶，能够水解青霉素类和窄谱头孢菌素类（如头孢唑林），但不能水解三代头孢菌素和碳青霉烯类。

与ATCC 25922（敏感株）配对使用时，35218负责验证"含抑制剂药物的有效性"，而25922负责验证"不含抑制剂药物的基线敏感性"。

| 项目 | 内容 |

|------|------|

| 学名 | Escherichia coli |

| ATCC编号 | 35218 |

| 生物安全等级 | BSL-1 |

| 推荐培养基 | MHA（K-B法）/ CAMHB（MIC法） |

| 培养温度 | 35±2°C |

| 关键耐药特征 | 产TEM-1型β-内酰胺酶 |

| 对氨苄西林 | 耐药（MIC >32 μg/mL） |

| 对氨苄西林/舒巴坦 | 敏感（MIC ≤8/4 μg/mL） |

生物学特性与形态

形态和生化特性与ATCC 25922基本一致：革兰阴性短杆菌，MHA上灰白色光滑菌落，IMViC反应++--。

关键区别在于耐药表型。ATCC 35218携带的blaTEM-1基因通常位于质粒上，编码的TEM-1酶可高效水解氨苄西林、阿莫西林、哌拉西林等酰基脲青霉素类，但对以下药物无水解活性：三代头孢菌素（头孢噻肟、头孢他啶）、碳青霉烯类（亚胺培南、美罗培南）、头孢霉素类（头孢西丁）。

TEM-1酶的活性可被克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦等β-内酰胺酶抑制剂有效抑制。这就是为什么ATCC 35218对氨苄西林单药耐药、但对氨苄西林/舒巴坦复合药物敏感的机制基础。

笔者提醒：TEM-1酶的表达水平可能因质粒拷贝数变化而波动。如果发现质控MIC值出现漂移，应排查菌株传代次数是否过多。

培养条件与操作要点

操作规范与ATCC 25922一致。K-B法和MIC法的培养基、温度、接种浓度均相同。

β-内酰胺酶检测： ATCC 35218是头孢硝噻吩（nitrocefin）试验的标准阳性对照。操作时将头孢硝噻吩纸片滴加菌悬液，10分钟内颜色由黄变红即为阳性。笔者建议每次药敏质控前都做一次头孢硝噻吩试验确认产酶状态。

在各标准中的应用

CLSI M100中的应用

ATCC 35218在CLSI M100中专门用于β-内酰胺酶抑制剂复合药物的MIC法质控。

MIC法质控范围（μg/mL）：

| 药物 | MIC范围 |

|------|---------|

| 阿莫西林/克拉维酸 (2:1) | 0.5/0.25-2/1 |

| 氨苄西林 | >32（耐药，验证产酶） |

| 氨苄西林/舒巴坦 (2:1) | 2/1-8/4 |

| 哌拉西林 | >128（耐药） |

| 哌拉西林/他唑巴坦 (固定浓度) | 1/4-8/4 |

| 替卡西林/克拉维酸 | 0.5/2-2/2 |

| 头孢噻肟 | 0.03-0.25 |

| 头孢他啶 | 0.06-0.5 |

| 亚胺培南 | 0.06-0.5 |

K-B法质控抑菌圈范围：

| 抗生素 | 纸片含量 | 抑菌圈范围(mm) |

|--------|----------|---------------|

| 阿莫西林/克拉维酸 | 20/10μg | 17-22 |

| 氨苄西林/舒巴坦 | 10/10μg | 13-19 |

| 哌拉西林/他唑巴坦 | 100/10μg | 24-30 |

与ATCC 25922的分工

CLSI M100的质控设计逻辑非常清晰：不含抑制剂的β-内酰胺药物（如氨苄西林单药、头孢菌素）使用ATCC 25922质控；含抑制剂的药物（如阿莫西林/克拉维酸）使用ATCC 35218质控。两者的配合确保了药敏试验系统的完整覆盖。

行业质控用途

β-内酰胺酶抑制剂复合药物验证： 这是ATCC 35218最核心的应用。每当实验室引入新的抑制剂复合药物或更换试剂批号时，必须用该菌株验证MIC或抑菌圈是否在允许范围内。

β-内酰胺酶检测系统验证： 作为头孢硝噻吩试验的阳性对照，验证酶检测试剂的有效性。

ESBL筛选的辅助参考： 虽然ATCC 35218产的是TEM-1（广谱酶而非超广谱酶），但在某些实验室的ESBL筛选流程中，它可作为非ESBL产酶株的参考对照。

菌种保藏与管理

与ATCC 25922相同的管理规范。额外注意：由于TEM-1基因位于质粒上，高传代可能导致质粒丢失，因此传代次数应严格控制在5代以内。每批新工作菌种务必做头孢硝噻吩试验确认产酶状态。

安全注意事项

BSL-1级别，基本防护要求同ATCC 25922。在生物安全柜内操作，穿戴实验服和手套。

常见问题与工程师建议

Q1：ATCC 35218对氨苄西林/克拉维酸的MIC偏高，如何排查？

首先确认克拉维酸的活性——克拉维酸对光和热敏感，复合药物纸片应在有效期内且2-8°C密封保存。其次检查CAMHB的pH值，偏碱性环境会降低克拉维酸的酶抑制活性。最后做头孢硝噻吩试验确认菌株仍产β-内酰胺酶。

Q2：TEM-1和ESBL有什么区别？

TEM-1是经典的广谱β-内酰胺酶，仅能水解青霉素类和一代头孢菌素。ESBL（超广谱β-内酰胺酶）是由TEM-1或SHV-1等基因突变产生的变异酶（如TEM-3、SHV-12、CTX-M-15），可水解三代头孢菌素和氨曲南。ATCC 35218产的是TEM-1（非ESBL），ATCC 700603产的是SHV-18型ESBL。

Q3：哌拉西林/他唑巴坦的质控MIC范围为什么这么宽？

这是因为哌拉西林/他唑巴坦有两种不同的药敏折点体系（固定浓度法和固定比例法），不同折点对应的质控范围不同。CLSI M100中通常给出的是固定浓度法（他唑巴坦4 μg/mL固定）的MIC范围。使用前请确认实验室采用的是哪种折点体系。

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关键词标签: ATCC 35218, 大肠埃希菌, TEM-1, β-内酰胺酶, 抑制剂复合药物, 阿莫西林克拉维酸, 哌拉西林他唑巴坦, 药敏质控, CLSI M100