ATCC 25922大肠埃希菌药敏质控标准菌株

导读： 大肠埃希菌是临床最常见的革兰阴性致病菌之一，也是药敏试验质控体系中的关键参考菌种。ATCC 25922作为一株不产β-内酰胺酶的敏感型大肠埃希菌，同时适用于K-B纸片法和MIC肉汤稀释法两种药敏方法的质控。本文从QC工程师的工作实践出发，详解该菌株的特性、操作要点及在CLSI M100标准中的应用。

菌株基本信息

ATCC 25922是药敏质控领域使用频率最高的大肠埃希菌标准菌株之一。它与ATCC 35218形成配对关系：25922为敏感株（不产β-内酰胺酶），35218为产酶株（产TEM-1型β-内酰胺酶）。两者搭配使用，可全面覆盖革兰阴性菌药敏试验的质控需求。

| 项目 | 内容 |

|------|------|

| 学名 | Escherichia coli |

| ATCC编号 | 25922 |

| 生物安全等级 | BSL-1 |

| 推荐培养基 | MHA（纸片法）/ CAMHB（MIC法） |

| 培养温度 | 35±2°C |

| 培养时间 | 16-18小时 |

| 关键特征 | 不产β-内酰胺酶，对多数抗生素敏感 |

生物学特性与形态

ATCC 25922为革兰阴性短杆菌，在MHA平板上35°C培养18小时后，菌落呈灰白色、光滑、湿润，直径约2-3mm。生化鉴定：氧化酶阴性、吲哚阳性、甲基红阳性、V-P阴性、枸橼酸盐阴性——这是大肠埃希菌的经典IMViC反应模式（++--）。

该菌株不产β-内酰胺酶（blaTEM阴性、blaSHV阴性），不含ESBL基因，对氨苄西林、头孢菌素类、氟喹诺酮类等常用抗生素均表现为敏感。这一"全敏感"特性使其在质控中扮演的角色类似ATCC 25923之于金黄色葡萄球菌——质控参数应落在CLSI规定的窄范围内，任何偏离都提示试验系统可能存在问题。

笔者在工作中发现，ATCC 25922的生长速度比金黄色葡萄球菌稍快，在MHA上16小时即可获得良好的菌落。但要注意培养时间不宜超过20小时，过长的培养可能导致部分药物（如碳青霉烯类）的抑菌圈因药物降解而偏小。

培养条件与操作要点

K-B法操作

操作规范与金黄色葡萄球菌K-B法基本一致：

1. 从MHA平板挑取3-5个新鲜菌落，悬浮于生理盐水中，调整浊度至0.5号麦氏标准

2. 用无菌棉签在MHA平板上密涂三遍（每次旋转60°）

3. 室温放置3-5分钟，贴抗生素纸片

4. 35°C培养16-18小时后读取抑菌圈直径

特别注意： 大肠埃希菌的0.5号麦氏标准对应的菌液浓度约为1-2×10⁸ CFU/mL，与金黄色葡萄球菌基本一致。但由于大肠埃希菌在生理盐水中的悬浮稳定性略差，制备菌悬液后应尽快完成涂布（建议30分钟内）。

MIC法操作

使用CAMHB培养基，接种浓度5×10⁵ CFU/mL，35°C培养16-20小时。操作方法与ATCC 29213的MIC法质控一致。

在各标准中的应用

CLSI M100中的应用

ATCC 25922是CLSI M100同时指定用于K-B法和MIC法的大肠埃希菌质控菌株。

K-B法质控抑菌圈范围：

| 抗生素 | 纸片含量 | 抑菌圈范围(mm) |

|--------|----------|---------------|

| 氨苄西林 | 10μg | 15-22 |

| 头孢唑林 | 30μg | 23-29 |

| 头孢噻肟 | 30μg | 34-42 |

| 头孢他啶 | 30μg | 25-32 |

| 环丙沙星 | 5μg | 30-40 |

| 庆大霉素 | 10μg | 19-26 |

| 复方新诺明 | 1.25/23.75μg | 24-34 |

| 亚胺培南 | 10μg | 26-34 |

MIC法质控范围（μg/mL）：

| 抗生素 | MIC范围 |

|--------|---------|

| 氨苄西林 | 2-8 |

| 头孢噻肟 | 0.015-0.12 |

| 头孢他啶 | 0.06-0.5 |

| 环丙沙星 | 0.004-0.015 |

| 庆大霉素 | 0.25-1 |

| 亚胺培南 | 0.06-0.5 |

| 美罗培南 | 0.008-0.06 |

| 哌拉西林/他唑巴坦 | 1/4-8/4 |

与ATCC 35218的配对使用

CLSI M100明确规定：对于β-内酰胺酶抑制剂复合药物（如阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦），质控应使用ATCC 35218（产β-内酰胺酶株）。而对于不含抑制剂的单方β-内酰胺类药物，质控使用ATCC 25922（敏感株）。两者在质控设计中互为补充。

欧洲药典与中国药典

EP 2.7.2（微生物学检查-抗菌药物敏感性试验）和中国药典2020版中，大肠埃希菌的药敏质控参考菌株选择通常遵循CLSI或EUCAST的推荐标准。

行业质控用途

常规室内质控： 临床实验室开展革兰阴性杆菌药敏试验时，ATCC 25922是最基本的质控菌株之一，与ATCC 27853（铜绿假单胞菌）搭配覆盖革兰阴性菌的主要质控范围。

培养基与纸片批次验证： 每批新到MHA平板和抗生素纸片均须用ATCC 25922验证合格后方可投入使用。

自动化药敏系统校验： Vitek 2、MicroScan等自动化系统在定期校验中，ATCC 25922是革兰阴性菌模块的标准质控菌。

新药体外评价： 在抗菌新药研发中，ATCC 25922是体外药敏试验的标准参考菌株之一。

菌种保藏与管理

冻干管在2-8°C长期保存。复苏后在MHA平板上传代培养，制备工作菌种保存于MHA斜面（2-8°C，不超过4周）或-80°C甘油冻存管（不超过12个月）。

传代次数控制在5代以内。每批新工作菌种应通过生化试验（或MALDI-TOF）确认菌种身份，并做β-内酰胺酶检测（头孢硝噻吩试验应为阴性）以验证其敏感株特性。

安全注意事项

ATCC 25922为BSL-1级别，是所列质控菌株中安全性最高的。大肠埃希菌的绝大多数菌株属于人体肠道正常菌群，但在实验室高浓度操作时仍应注意基本防护。

建议在生物安全柜或至少在有物理屏障的环境下操作。穿戴实验服和手套。废弃物高压灭菌处理。

常见问题与工程师建议

Q1：ATCC 25922的亚胺培南抑菌圈偏小（低于26mm），可能原因是什么？

碳青霉烯类药物在MHA中的稳定性受锌离子影响。如果MHA中Zn²⁺含量过高，亚胺培南的抑菌圈可能偏小。建议检查MHA平板的批号和质控证书中的阳离子含量。此外，亚胺培南纸片应在有效期内使用，且储存温度严格保持2-8°C。

Q2：为什么大肠埃希菌需要两个质控菌株（25922和35218）？

这是因为β-内酰胺类药物在敏感株和产酶株上的表现完全不同。敏感株（25922）用于验证培养基和操作系统的准确性；产酶株（35218）用于验证抑制剂复合药物的有效性。两者缺一不可，共同构成革兰阴性菌β-内酰胺类药物药敏质控的完整体系。

Q3：BSL-1菌株可以在普通实验台上操作吗？

虽然ATCC 25922的生物安全等级较低，但笔者仍建议在生物安全柜中操作。原因有二：一是避免操作过程中气溶胶扩散污染实验室环境；二是防止环境中其他微生物污染质控菌株。良好的操作习惯是保证质控结果可靠性的基础。

关于杭州康氧医疗器械有限公司

杭州康氧医疗器械有限公司专注于微生物标准菌株、ATCC菌株及相关质控产品的供应与技术服务，致力于为制药企业、食品检测机构和科研院所提供可靠的微生物质控解决方案。如需了解ATCC标准菌株产品信息或技术支持，官网：www.kystrains.com

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免责声明： 本文所述菌株信息及技术参数均来源于ATCC官网、CLSI M100标准、美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、《中国药典》2020年版、ISO国际标准及《消毒技术规范》等公开权威资料，仅供专业技术参考。具体实验操作请以产品随附的质检报告(COA)和说明书为准，并严格遵守所在机构的生物安全管理制度。本文不构成任何产品推荐或使用建议。

关键词标签: ATCC 25922, 大肠埃希菌, Escherichia coli, 药敏质控, K-B法, MIC法, CLSI M100, BSL-1, β-内酰胺酶阴性, 标准菌株