大鼠维生素D2(VD2)ELISA试剂盒

本试剂盒依托竞争性酶联免疫吸附试验原理，特异性针对大鼠VD2建立免疫检测体系。酶标板微孔包被VD2纯化抗原，检测过程中样本中的VD2抗原与板上固相抗原竞争结合对应的特异性抗体，孵育结束后洗板，去除未结合的游离组分。加入酶标记抗体与显色底物完成显色反应，样本中VD2浓度越高，显色效果越弱，结合标准曲线即可定量检测大鼠样本中VD2的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤1ng/mL

检测范围：2ng/mL - 80ng/mL

反应时间：总时长100分钟，孵育55分钟，显色25分钟

保存条件：试剂盒2-8℃避光冷藏，标准品-20℃冻存

有效期：原装有效期9个月，标准品解冻后一次性使用，不可复冻

特异性：特异性靶向大鼠VD2，与VD3交叉反应率＜3%，无其他脂溶性维生素干扰

重复性：板内CV≤5%，板间CV≤7%

注意事项：严格区分VD2、VD3检测样本，避免样本混淆；实验耗材需干燥无菌，防止污染酶孔。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

微孔板室温回温 28min，梯度稀释 VD2 标准品，待测样本稀释预处理，每孔加样 50μL，空白孔补稀释液。

直接加入酶标工作液 50μL，封板避光，37℃恒温孵育 62min。

洗板 6 次，每次洗液浸泡 25s 后弃液，板条倒扣拍干。

每孔加入显色液 A、B 各 50μL，避光显色 16min。

加入终止液 50μL 终止反应。

10min 内 450nm 酶标仪读取 OD 值。

标准曲线定量，折算稀释比例，得出样本 VD2 含量。