大鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA试剂盒

本试剂盒基于特异性双抗体夹心ELISA原理，专一性检测大鼠样本中GP-II含量。固相酶标板包被大鼠GP-II特异性捕获抗体，精准结合样本中的GP-II同工酶抗原，排除GP-BB、GP-MM等同工酶干扰，洗涤纯化体系后加入HRP标记的GP-II检测抗体，形成特异性免疫复合物，底物显色强度与GP-II含量成正比，通过标准曲线可完成精准定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限0.28ng/mL，可稳定检测大鼠肝脏、肌肉组织中GP-II含量。

检测范围：0.55ng/mL - 17ng/mL，覆盖大鼠肝糖代谢、肌肉损伤模型检测范围。

反应时间：总时长100分钟，抗原抗体结合75分钟，显色25分钟。

保存条件：全套试剂2-8℃冷藏，洗涤液室温保存，浓缩试剂使用前混匀。

有效期：未开封有效期6个月，工作液现配现用。

特异性：专一靶向GP-II同工酶，不识别GP-BB、GP-MM亚型，无交叉干扰。

重复性：板内CV≤6.2%，板间CV≤7.9%，实验重复性良好。

注意事项：肌肉、肝脏样本需充分匀浆离心，取上清检测，避免杂质影响结果。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 30min，按说明书稀释浓缩洗涤液，配制 GP-II 系列梯度标准品，拆分酶标板，多余板条密封 2~8℃避光存放。

区分空白孔、梯度标准品孔、待测样本孔；标准品孔加入对应浓度标准溶液 50μL，样本孔加入稀释待测液 50μL，空白孔不加试剂。

除空白孔外每孔加入酶结合工作液 100μL，封板膜密封酶标板，37℃孵育 60min。

撕掉封板膜，倾倒废液，洗涤液浸泡每孔 35s 后拍干，重复洗板 5 次。

每孔依次加入显色液 A、B 各 50μL，轻柔震荡混匀，37℃避光显色 16min。

每孔加入终止液 50μL，充分混匀终止反应。

酶标仪 450nm 检测 OD 值，换算样本 GP-II 含量。