大鼠胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验原理，将纯化的大鼠胰岛素抗原包被于酶标板固相载体，封闭非特异性结合位点后，加入大鼠待测样本，样本中存在的胰岛素自身抗体可与固相胰岛素抗原特异性结合，洗涤洗去未结合杂质，加入酶标记的抗大鼠IgG二抗并孵育结合，再次洗涤后加入底物显色体系发生显色反应，样本中IAA含量越高，显色越深，通过酶标仪检测吸光度，对照标准曲线即可测定样本中胰岛素自身抗体的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒

英文名称：IAA ELISA Kit
货号：Y-E1097

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测值0.2U/mL

检测范围：0.5U/mL - 50U/mL

反应时间：全程180分钟（样本孵育120min，酶标孵育30min，显色30min）

保存条件：试剂盒2-8℃冷藏，抗体工作液避光保存，禁止室温久置

有效期：未开封储存有效期6个月

特异性：特异性结合大鼠胰岛素自身抗体，与其他免疫球蛋白、胰岛相关抗体无交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤7%，板间变异系数CV≤9%

注意事项：样本避免高温灭活，防止抗体变性；实验全程无菌操作，避免杂蛋白污染；空白孔、对照孔需严格设置，保证结果准确性
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 30min，稀释浓缩洗涤液，配制 IAA 系列标准品，酶标板划分空白、标准、待测样本三组孔位并编号。

标准孔加入梯度 IAA 标准品 50μL，样本孔加入 50μL 大鼠待测血清，空白孔不添加试剂与样品。

全部检测孔加入一步法酶偶联抗原工作液 100μL，覆膜密封，37℃恒温避光孵育 50min。

去除封板膜，倾倒废液，每孔加满洗涤液浸泡 35s 后甩干，重复洗板 5 次，吸水纸拍干孔底残液。

每孔加入显色 A 液 50μL、显色 B 液 50μL，避光 37℃显色 18min。

逐孔加入终止液 50μL 终止显色反应，水平摇晃酶标板混匀体系。

酶标仪 450nm 测 OD 值，建立标准曲线，计算大鼠样本内胰岛素自身抗体 IAA 浓度。
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