大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接ELISA法检测大鼠血清及体液中的MPO-ANCA IgG含量。本试剂盒预先将纯化的大鼠MPO抗原包被于酶标板孔内，加入待测样本后，样本中特异性MPO-ANCA IgG会与固相MPO抗原特异性结合，洗板去除未结合杂质，再加入酶标记的抗大鼠IgG二抗，与样本结合的特异性抗体结合，催化底物显色，吸光度值与样本中MPO-ANCA IgG含量呈正相关，对照标准曲线即可完成定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.2AU/mL，可精准识别大鼠血清中微量MPO-ANCA IgG抗体。

检测范围：0.4AU/mL - 30AU/mL，适配大鼠自身免疫模型、血管炎模型血清样本检测。

反应时间：总时长130分钟，抗原包被结合90分钟，抗体孵育30分钟，显色10分钟。

保存条件：抗体试剂2-8℃避光保存，避免污染，标准品密封冷藏，严禁冷冻。

有效期：未开封有效期7个月，稀释工作液仅限当日实验使用。

特异性：仅特异性结合大鼠MPO-ANCA IgG，与其他ANCA亚型、免疫球蛋白无交叉反应。

重复性：板内CV≤5.5%，板间CV≤7%，抗体检测数据稳定性高。

注意事项：血清样本需分离彻底，无溶血、脂血，溶血样本会严重干扰抗体检测结果。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 32min，配制洗涤工作液，梯度稀释配套标准品，取用所需酶标板条，剩余板条防潮密封低温保存。

划分空白孔、标准品孔、待测血清样本孔；标准品孔加标准液 50μL，样本孔加入稀释血清样本 50μL，空白孔无试剂添加。

标准品与样本孔加入酶联二抗工作液 100μL，封板后 37℃恒温孵育 75min。

撕掉封板膜，倾倒废液，洗涤液加满每孔静置 40s，吸水纸拍干，重复洗板 6 次。

每孔分别加入显色 A 液、B 液 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 19min。

每孔滴加终止液 50μL，充分混匀终止反应体系。

450nm 波长检测吸光度，绘制标准曲线计算样本 MPO-ANCA IgG 浓度。