大鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA试剂盒

本试剂盒采用高特异性双抗体夹心ELISA技术检测大鼠样本中AQP-4含量。酶标板孔壁固化大鼠AQP-4特异性捕获抗体，加入待测样本、梯度标准品后，AQP-4抗原与固相抗体特异性结合，洗板纯化体系后，加入HRP标记的AQP-4检测抗体，形成稳定的免疫夹心复合物，底物显色后颜色深浅与样本中AQP-4浓度成正比，通过酶标仪读数并对照标准曲线，可精准定量大鼠AQP-4的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.08ng/mL，是AQP家族高灵敏度检测试剂盒，适配脑组织微量样本检测。

检测范围：0.16ng/mL - 8ng/mL，专门适配大鼠脑组织、脊髓组织中AQP-4蛋白定量检测。

反应时间：总时长110分钟，低温预孵育10分钟，37℃孵育80分钟，显色20分钟。

保存条件：试剂2-8℃冷藏，严禁冷冻结冰，标准品稀释后需分装-20℃保存。

有效期：原装保存有效期9个月，稀释后的工作液仅限当日使用。

特异性：高度特异性结合大鼠AQP-4抗原，无家族亚型交叉反应，不受脑组织杂蛋白干扰。

重复性：板内CV≤4.5%，板间CV≤6.5%，检测数据稳定性优异。

注意事项：脑组织样本需低温快速取材，避免蛋白降解，实验全程避免强光直射试剂。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 20min，配制洗涤工作液，逐级稀释标准品制备浓度梯度，拆分酶标板，未使用板条密封低温避光保存。

设定空白孔、标准品孔、样本孔；标准品孔加入梯度标准品 50μL，待测孔加入大鼠待测样本 50μL，空白孔不添加液体。

非空白孔全部加入酶标二抗工作液 100μL，封板膜密封酶标板，37℃避光孵育 65min。

移除封板膜，倾倒弃液，洗涤液加满每孔静置 30s，拍干，重复洗板 5 次。

每孔加入显色液 A、B 各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 16min。

加入终止液 50μL 混匀终止显色。

酶标仪 450nm 测 OD 值，绘制标准曲线计算 AQP-4 样本浓度。