大鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶免疫分析法检测大鼠AQP-3含量。以包被于酶标板的大鼠AQP-3特异性抗体为固相捕获抗体，结合样本及标准品中的AQP-3抗原，通过洗涤去除未结合的杂蛋白与杂质，再加入酶标记的AQP-3配对抗体进行特异性结合，形成夹心式免疫复合物，利用底物的酶促显色反应产生有色产物，吸光度值与样本中AQP-3含量呈正相关，通过标准曲线拟合即可定量检测样本中大鼠AQP-3的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低可检测0.2ng/mL的AQP-3蛋白，精准捕捉大鼠肺、皮肤组织中微量目标蛋白。

检测范围：0.4ng/mL - 15ng/mL，覆盖大鼠多种组织样本中AQP-3的正常及异常表达浓度区间。

反应时间：全程85分钟，样本孵育55分钟，酶结合物孵育20分钟，显色反应10分钟。

保存条件：试剂盒干粉试剂2-8℃保存，液体试剂避光冷藏，禁止高温暴晒。

有效期：未开封有效期6个月，开盖后密封保存，30天内使用有效。

特异性：仅靶向识别大鼠AQP-3蛋白，与其他水通道蛋白、同源跨膜蛋白无交叉反应。

重复性：板内变异系数≤7%，板间变异系数≤9%，满足常规科研实验精度要求。

注意事项：组织匀浆样本需充分裂解、离心取上清，避免组织残渣影响吸附反应，读板波长严格设定450nm。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温静置 30min 复温，稀释浓缩洗涤液，梯度配制 AQP-3 标准品溶液，取出实验用板条，多余板条密封置于 2~8℃保存。

划分酶标板孔位：空白孔、梯度标准品孔、待测样品孔；标准品孔加对应浓度标准液 50μL，样品孔加入稀释后待测样本 50μL，空白孔不加试剂。

向标准品孔与样品孔加入酶偶联试剂 100μL，封板封口，37℃恒温培养箱孵育 60min。

弃净孔内液体，每孔加满洗涤液浸泡 35s，用力拍干，连续洗板 5 遍，确保孔底无残留废液。

每孔依次加入显色 A 液、B 液各 50μL，避光轻柔混匀，37℃避光显色 18min。

每孔添加终止液 50μL 终止反应，充分混匀终止体系。

450nm 波长酶标仪读板，根据标准曲线方程计算样本中 AQP-3 浓度数值。