大鼠瘦素(LEP)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，酶标板预包被纯化的大鼠瘦素LEP特异性抗体。检测体系中，样本、标准品中的LEP抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质后，加入酶标记的LEP检测抗体，构建完整的免疫夹心复合物。经显色、终止、吸光度检测步骤，结合标准曲线可精准测算大鼠样本中瘦素的表达浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.15ng/mL，精准检测脂肪代谢微量瘦素。

检测范围：0.4ng/mL - 80ng/mL，适配大鼠血清、脂肪组织、脑脊液样本。

反应时间：全程85分钟，样本温育30分钟、二抗温育30分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃冷藏避光，试剂密封保存，防止蛋白失活。

有效期：未开封有效期12个月，开封后4周内用完。

特异性：特异性识别大鼠瘦素，与脂联素、抵抗素无交叉反应。

重复性：板内CV≤6.2%，板间CV≤8.2%，代谢激素检测精度高。

注意事项：高脂血清样本需静置澄清后检测，避免脂类物质干扰实验结果。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温放置 25min，稀释洗涤液，梯度稀释瘦素 LEP 标准品，拆分酶标板条并标记，大鼠脂肪组织匀浆上清作为待测样本。

标准孔加入 LEP 标准稀释液 50μL，样本孔加入匀浆上清 50μL，空白孔补稀释缓冲液 50μL，全孔加入酶标记二抗工作液 100μL，密封封板。

37℃避光孵育 55min，固相载体捕获瘦素抗原。

去除封板弃液，洗涤液浸泡每孔 36s，甩干洗板 5 次，去除非特异性吸附组分。

每孔加注显色 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 14min。

加入终止液 50μL 终止显色反应，轻晃酶标板混匀。

450nm 波长读取 OD 值，计算样本瘦素 LEP 含量。