大鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，将高特异性大鼠ECP抗体包被于酶标板微孔。加入样本与标准品后，其中的ECP抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合组分，加入辣根过氧化物酶标记的二抗形成免疫复合物。底物显色终止后检测吸光度，吸光度值与样本ECP含量正相关，结合标准曲线可精准定量大鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.3ng/mL，适配过敏性炎症微量蛋白检测。

检测范围：0.8ng/mL - 160ng/mL，适配大鼠血清、气道灌洗液、炎症组织样本。

反应时间：全程90分钟，37℃样本温育35分钟、酶结合物温育30分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃避光保存，显色液严禁接触强光，防止氧化变色。

有效期：未开封有效期9个月，开封后2周内使用完毕。

特异性：特异性结合大鼠ECP，与其他粒细胞阳离子蛋白无交叉反应。

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%，过敏炎症指标检测稳定。

注意事项：灌洗液样本需低速离心去除细胞碎片，避免杂质干扰显色反应。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 34min，配比稀释浓缩洗涤液，逐级配制 ECP 标准品稀释梯度，酶标板划分空白、标准、样本区域，大鼠血清样本稀释备用。

标准品孔加入 ECP 梯度标准液 50μL，样本孔加入稀释血清 50μL，空白孔添加样本稀释液 50μL，每孔加入酶结合物工作液 100μL，封板膜封口。

37℃避光孵育 61min，抗原抗体充分特异性结合。

撕除封板倾倒废液，洗涤液注满每孔浸泡 32s，循环洗板 5 次，拍干酶标板残留液体。

每孔依次滴加显色 A 液、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 17min。

滴加终止液 50μL 终止显色，水平轻摇酶标板混匀体系。

15min 内 450nm 测定 OD 吸光度，标准曲线换算 ECP 浓度。