大鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，预先将纯化的大鼠GHRP-Ghrelin特异性抗体包被于酶标板微孔。加入待测样本和标准品后，目标抗原与固相抗体特异性免疫结合，洗孔清除游离物质，再加入酶标记检测抗体形成稳定复合物。经底物显色、终止反应后检测吸光度，数值随样本Ghrelin含量升高而增大，通过标准曲线可精准定量大鼠生长激素释放肽的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.18pg/mL，可精准检出低浓度Ghrelin多肽。

检测范围：0.4pg/mL - 110pg/mL，适配大鼠血清、胃组织、肠道组织样本。

反应时间：全程100分钟，抗原温育40分钟、酶标抗体温育35分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃避光保存，浓缩试剂严禁冷冻，开盖后及时密封。

有效期：原装有效期12个月，开封后1个月内使用完毕。

特异性：专一识别大鼠Ghrelin，与GHRP同源多肽无交叉免疫反应。

重复性：板内CV≤7.2%，板间CV≤9.2%，胃肠调节因子检测稳定。

注意事项：胃肠组织样本需去除内容物，充分清洗后研磨，避免杂质干扰结果。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 35min，稀释浓缩洗涤液，逐级配制 Ghrelin 标准品梯度液，酶标板标记空白、标准、样本孔，大鼠胃组织匀浆离心制备待测上清。

标准品孔加入 Ghrelin 梯度标准液 50μL，样本孔加入待测上清 50μL，空白孔加样本稀释液 50μL，每孔加入酶结合物工作液 100μL，封膜封闭。

37℃避光孵育 70min，夹心免疫反应充分进行。

掀开封板倾倒废液，洗涤液注满每孔浸泡 33s，重复洗板 5 次，吸水纸拍干板条残留液体。

每孔依次滴加显色 A 液、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 20min。

逐孔添加终止液 50μL 终止显色，轻微振荡酶标板混匀体系。

10min 内 450nm 测定 OD 值，依据标准曲线计算 Ghrelin 含量。