大鼠肾上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔预包被高特异性大鼠ADRA1A受体抗体。实验过程中，样本与标准品中的ADRA1A抗原与固相抗体特异性结合，洗涤清除游离杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成特异性免疫夹心复合物。经底物显色、终止反应后检测吸光度，数值与样本中ADRA1A含量呈正相关，结合标准曲线可定量检测目标受体的表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.3ng/mL，可精准检测受体蛋白微量表达量。

检测范围：0.9ng/mL - 180ng/mL，适配大鼠心脏、血管、肾组织匀浆样本。

反应时间：全程110分钟，抗原温育50分钟、酶标抗体温育35分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃密封冷藏，受体抗体组分单独存放，避免交叉污染。

有效期：原装有效期10个月，开盖后3周内完成检测。

特异性：专一识别大鼠ADRA1A受体，与a1B、a1D亚型受体无交叉反应。

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%，受体蛋白检测稳定性达标。

注意事项：组织匀浆需充分裂解细胞膜，保证受体蛋白充分释放；去除杂质蛋白干扰。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 36min，稀释浓缩洗涤液，逐级配制 ADRA1A 标准品，酶标板划分对照与检测孔，大鼠细胞膜裂解液作为待测样本。

标准品孔加入梯度 ADRA1A 标准液 50μL，样本孔加入裂解待测样本 50μL，空白孔加稀释液 50μL，每孔加入酶偶联抗体工作液 100μL，封膜封口。

37℃避光孵育 72min，固相夹心捕获靶蛋白。

撕掉封板倾倒废液，洗涤液浸泡每孔 34s，甩干后连续洗板 5 次，拍干板底液体。

每孔加注显色 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 21min。

滴加终止液 50μL 终止酶促显色反应，小幅震荡混匀酶标板。

酶标仪 450nm 读取 OD 值，标准曲线法计算 ADRA1A 蛋白含量。