大鼠神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，酶标板预包被纯化的大鼠NP-Y特异性抗体。检测过程中，样本与标准品中的NP-Y抗原与固相抗体特异性免疫结合，洗涤后加入酶标记检测抗体，组装形成稳定的夹心复合物。经TMB底物显色、终止液终止反应后，检测各孔吸光度值，该数值与样本中NP-Y的含量呈正相关，通过标准曲线计算即可得到样本中大鼠神经肽Y的精准浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.15pg/mL，适配微量神经肽定量检测。

检测范围：0.4pg/mL - 90pg/mL，适配大鼠脑组织、脑脊液、血清样本。

反应时间：总时长100分钟，样本温育40分钟、二抗温育35分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃避光密封保存，终止液、显色液单独分类存放。

有效期：原装未开封有效期10个月，开盖后3周内用完。

特异性：特异性结合大鼠神经肽Y，与其他神经肽家族物质无交叉识别。

重复性：板内CV≤7.2%，板间CV≤9.2%，检测数据偏差小。

注意事项：脑脊液样本需低速离心，去除细胞碎片；温育过程杜绝微孔板晃动。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂盒室温回温 26min，稀释洗涤液，梯度稀释 NP-Y 标准品，划分酶标板孔位组别，预处理大鼠脑脊液待测样本。

标准孔加入 NP-Y 标准稀释液 50μL，样本孔加入待测脑脊液样本 50μL，空白孔补稀释液 50μL，所有孔加入酶偶联抗体工作液 100μL，封板密封。

37℃避光孵育 52min，完成固相免疫结合。

弃去孔内液体，洗涤液浸泡每孔 36s 后甩干，循环洗板 5 次，清除游离未结合蛋白。

每孔加注显色底物 A、B 各 50μL，混匀后 37℃避光显色 15min。

加入终止液 50μL 终止显色反应，小幅摇晃酶标板混匀。

450nm 检测吸光度，对照标准曲线计算 NP-Y 含量。