大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测原理，酶标板预先包被纯化的大鼠LF/LTF特异性抗体。检测体系中，样本、标准品内的LF/LTF抗原可与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质后，加入酶标记的抗大鼠LF/LTF抗体，形成稳定的夹心免疫复合物。经底物显色、终止反应后，测定各孔吸光度，其数值与样本中LF/LTF含量呈线性正相关，通过标准曲线拟合，可精准定量大鼠样本中目标蛋白的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.2ng/mL，可精准检测微量LF蛋白含量。

检测范围：0.5ng/mL - 100ng/mL，适用于大鼠血清、乳汁、支气管肺泡灌洗液样本。

反应时间：总时长100分钟，样本结合温育45分钟、二抗温育30分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃避光密封保存，抗体组分严禁室温久放，防止失活。

有效期：原装试剂有效期12个月，开封后各组分4周内用完。

特异性：特异性识别大鼠LF/LTF，与转铁蛋白、乳清蛋白无交叉反应。

重复性：板内CV≤7.5%，板间CV≤9.5%，检测稳定性优异。

注意事项：灌洗液样本需过滤除菌，杂质颗粒会阻碍抗原抗体结合；实验全程避免强光直射。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 35min，配制洗涤工作液，逐级稀释 LF 标准品，标记酶标板各孔类型，提前预处理大鼠体液、组织待测样本。

标准孔加入梯度 LF 标准液 50μL，样本孔加入待测稀释样本 50μL，空白孔加稀释缓冲液 50μL，每孔加入酶标记二抗工作液 100μL，封板膜封口。

37℃避光孵育 70min，充分进行抗原 - 抗体夹心结合。

掀开封膜倒掉液体，每孔加满洗涤液浸泡 30s 后甩干，循环洗板 6 次，充分洗去非特异性结合物。

每孔加入显色液 A 50μL、显色液 B 50μL，混匀后 37℃避光显色 20min。

逐孔添加终止液 50μL 终止显色，轻微震荡酶标板混匀体系。

450nm 波长酶标仪测定吸光度，标准曲线法计算样本 LF/LTF 浓度。