大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒

本试剂盒运用经典双抗体夹心酶联免疫检测原理，将高特异性的大鼠LDH抗体包被在酶标板微孔中。加入待测样本和梯度标准品后，样本中的LDH抗原与固相抗体特异性结合，洗孔清除未结合成分后，加入酶标记二抗形成特异性免疫复合物。通过TMB底物显色，在酸性终止液作用下终止显色反应，酶标仪检测450nm处吸光度，样本吸光度值与LDH含量成正比，借助标准曲线可准确测算样本中大鼠LDH的浓度水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度0.3U/L，灵敏度高于常规生化检测方法。

检测范围：1U/L - 80U/L，适配大鼠血清、细胞培养液、组织匀浆多种样本。

反应时间：全程80分钟，37℃样本温育30分钟、酶标二抗温育25分钟、显色15分钟。

保存条件：试剂盒2-8℃冷藏，洗涤液稀释后可4℃保存7天，禁止冷冻结冰。

有效期：未开封有效期9个月，多次取用后剩余试剂有效期缩短至1个月。

特异性：特异性结合大鼠LDH，与LDH同工酶轻微反应，无其他杂蛋白交叉反应。

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%，满足科研定量检测标准。

注意事项：样本采集后需低温离心处理，避免LDH活性降解；显色时间需严格统一，避免色差偏差。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒常温回温 28min，稀释浓缩洗涤液，配制 LDH 标准品稀释梯度，拆分可拆酶标板，划分空白、标准、待测样本组别。

标准品孔加入对应浓度 LDH 标准液 50μL，样本孔加入大鼠血浆 / 匀浆上清样本 50μL，空白孔补稀释液 50μL，全部孔加入酶偶联抗体工作液 100μL，封膜密封。

37℃避光孵育 50min，实现固相载体上夹心免疫结合。

撕掉封板膜，弃去孔内液体，加满洗涤液静置 35s 后甩净，重复洗板 5 次，吸水纸拍干板底水分。

每孔依次添加显色 A 液、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 18min。

每孔加入终止液 50μL 终止显色反应，水平轻摇酶标板 30s 混匀。

酶标仪 450nm 检测 OD 值，依托标准曲线方程计算样本 LDH 含量。