大鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，用于大鼠热休克因子1（HSF1）的定量检测。微孔板预先包被纯化的HSF1特异性捕获抗体，加入待测样本和标准品后，样本中的HSF1抗原与固相抗体特异性结合，孵育洗板后加入酶标记检测抗体，构建完整的免疫复合物。洗板去除游离组分后进行底物显色，吸光度值与样本中HSF1含量正相关，结合标准曲线可准确测定其浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测值0.12ng/mL，高灵敏检测热休克转录因子HSF1。

检测范围：0.35ng/mL - 105ng/mL，覆盖大鼠热应激、基因调控、细胞抗损伤模型。

反应时间：全流程反应150分钟，转录因子结合孵育时长充足，检测精准。

保存条件：2 - 8℃冷藏避光保存，转录因子抗体需防潮密封存放。

有效期：原装试剂盒有效期6个月，低温恒定保存稳定。

特异性：特异性识别大鼠HSF1转录因子，与其他转录因子无交叉反应。

重复性：板内CV≤5.8%，板间CV≤7.8%，实验重复性良好。

注意事项：核蛋白样本提取需规范，保证HSF1完整性；样本避免反复冻融；孵育温度精准恒定。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂盒试剂室温复温 31min，稀释洗涤浓缩液；细胞核蛋白裂解样本冰上离心取上清。

2. 排布酶标板孔位，标准品孔加入梯度 HSF1 标准品 50μL，样本孔加入待测核蛋白上清 50μL，空白孔空置不加试剂。

3. 检测孔统一加入酶偶联工作液 100μL，封板膜封口防止液体挥发。

4. 37℃避光孵育 73min，全程孵箱温度恒定无波动。

5. 倒扣倒掉孔内液体，洗涤液浸泡 35s，洗板 5 次，微孔充分拍干。

6. 加入显色 A、B 液各 50μL，轻震混匀，37℃避光显色 20min。

7. 滴加终止液终止底物反应，450nm 测 OD 数值，绘制标准曲线测定 HSF1 含量。