大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，定量检测大鼠热休克蛋白糖蛋白96（HSP gp96）。酶标板固相载体包被HSP gp96特异性抗体，待测样本中的gp96抗原与固相抗体特异性结合，恒温孵育洗板后，加入酶标记的配套检测抗体，形成稳定的免疫夹心结构。底物经酶催化显色，吸光度数值与样本中HSP gp96含量呈正相关，终止反应后对照标准曲线即可完成精准定量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度0.2ng/mL，可精准检测大鼠内质网源性HSP gp96糖蛋白。

检测范围：0.7ng/mL - 120ng/mL，适配大鼠肿瘤免疫、内质网应激、炎症模型。

反应时间：全流程120分钟反应，适配糖蛋白特异性结合需求。

保存条件：2 - 8℃避光冷藏，糖蛋白试剂易变性，需严格密封。

有效期：未拆封有效期8个月，恒定温度保存活性稳定。

特异性：特异性结合大鼠HSP gp96糖蛋白，与普通热休克蛋白、其他糖蛋白无交叉反应。

重复性：板内CV≤6.2%，板间CV≤8.2%，重复性符合科研标准。

注意事项：样本避免高温、酸碱刺激，防止糖蛋白结构破坏；孵育条件严格标准化；显色避光操作。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂盒全部试剂室温放置 37min，配制洗涤工作液；内质网蛋白提取样本过滤离心备用。

2. 标记酶标板空白、标准、样本孔，标准品孔加入梯度 gp96 标准品 50μL，样本孔加入待测提取液 50μL。

3. 直接向检测孔加入酶标记抗体工作液 100μL，封板严实避光密封。

4. 37℃恒温避光孵育 82min，延长孵育保证抗原抗体结合效率。

5. 弃净孔内液体，洗涤液浸泡 45s，洗板 6 次，微孔反复拍干无残留洗液。

6. 每孔依次加入显色底物 A、B 各 50μL，混匀后 37℃避光显色 24min。

7. 加入终止液 50μL 终止显色，酶标仪 450nm 检测吸光度，换算样本 HSP gp96 浓度。