大鼠热休克蛋白40(HSP-40)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，定量检测大鼠热休克蛋白40（HSP-40）含量。酶标板微孔固定有HSP-40特异性捕获抗体，加入样本与标准品后，靶标抗原与固相抗体特异性结合，恒温孵育后洗板，再加入酶标记检测抗体形成免疫复合物。充分洗涤后进行底物显色反应，吸光度值与样本中HSP-40的含量呈正比例关系，依托标准曲线即可精准测定样本中靶标蛋白的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限值0.2ng/mL，可精准检出大鼠样本中HSP-40基础及诱导表达水平。

检测范围：0.6ng/mL - 110ng/mL，适配大鼠热应激、蛋白折叠异常、细胞损伤模型。

反应时间：全流程反应110分钟，标准化孵育流程，结果可靠。

保存条件：2 - 8℃冷藏避光保存，浓缩试剂使用前充分混匀。

有效期：原装试剂盒有效期8个月，控温保存活性稳定。

特异性：特异性识别大鼠HSP-40蛋白，与其他热休克蛋白亚型无交叉识别。

重复性：板内CV≤6.2%，板间CV≤8.2%，重复性达标。

注意事项：样本避免反复冻融，保护蛋白完整性；孵育过程保证孔板湿润；读数前排查孔内气泡，避免误差。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂盒试剂室温平衡 28min，稀释浓缩洗涤液；细胞上清样本去除杂质后分装待用。

2. 设定酶标板空白、标准、样本孔，标准品孔加梯度 HSP-40 标准品 50μL，样本孔加待测样本 50μL。

3. 除空白孔外每孔加入酶标记结合液 100μL，封板膜密封避光孵育。

4. 37℃避光孵育 69min，不挪动酶标板位置。

5. 揭开封板弃液，洗涤液浸泡微孔 33s，洗板 5 次，吸水纸拍干。

6. 加入显色底物 A、B 各 50μL，轻微震荡混匀，37℃避光显色 18min。

7. 滴加终止液 50μL，混匀后 450nm 检测 OD 值，绘制曲线测定 HSP-40 浓度。