大鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒

双抗体夹心 ELISA 原理，微孔板包被抗大鼠 IL-1sRⅠ 捕获抗体，样本可溶性 IL-1 受体 Ⅰ 结合固相抗体，洗涤后加入 HRP 标记抗 IL-1sRⅠ 检测抗体形成夹心复合物，底物显色读取 OD 值，对照标准曲线定量可溶性受体 Ⅰ 浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤0.3ng/mL

检测范围：0.6ng/mL - 65ng/mL

反应时间：样本孵育120分钟，二抗孵育60分钟，显色20分钟

保存条件：2-8℃避光冷藏，所有试剂密封防潮、禁止冷冻

有效期：原装试剂盒有效期6个月

显色系统：TMB底物显色，酸性终止液终止反应

检测波长：450nm检测吸光度

标准曲线绘制：梯度标准品检测OD值，四参数拟合绘制标准曲线，计算可溶性受体Ⅰ含量

特异性：特异性识别大鼠IL-1sRⅠ，与IL-1sRⅡ及其他细胞因子受体无交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：1. 受体蛋白易降解，样本需低温快速处理；2. 试剂严格区分型号，不可混用受体Ⅱ试剂盒试剂；3. 孵育条件恒定；4. 实验耗材无蛋白污染。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温放置 26min，洗涤液 1:20 稀释，全程避光。

标准品制备：IL-1sRⅠ 冻干标准品梯度稀释 7 个梯度，双复孔消除误差。

加样：标准孔 50μL 标准品，血清、细胞培养上清 50μL 加入检测孔。

酶标抗体孵育：每孔 50μL HRP-sRⅠ 抗体，密封 37℃避光孵育 72min。

洗板：洗涤液浸泡 42s，拍干，洗板 6 次。

显色：底物 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 22min。

终止读数：终止液混匀，10min 内 450nm 测 OD 值，计算 IL-1sRⅠ 含量。