大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测技术，预先将大鼠DAT特异性单克隆抗体包被于酶标板，加入标准品与待测大鼠神经组织样本，样本中的DAT抗原与固相抗体特异性结合，洗板清除未结合物质，加入HRP标记的DAT检测抗体，形成夹心免疫复合物，经洗涤后加入显色底物发生酶促反应，显色强度与样本DAT含量正相关，终止后通过标准曲线计算样本浓度。
基本参数‌：

产品名称：大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)ELISA试剂盒

英文名称：DAT ELISA Kit
货号：Y-E1090

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度可达0.1ng/mL，可精准识别微量大鼠DAT样本，无背景干扰

检测范围：0.2ng/mL～8ng/mL，覆盖大鼠血清、组织匀浆中DAT常规表达浓度区间

反应时间：整体实验操作时长90分钟，其中温育分两步，包被抗体结合60分钟，底物显色30分钟

保存条件：试剂盒未开封整体2～8℃冷藏保存，浓缩洗涤液室温避光保存，严禁冷冻

有效期：未开封原装试剂盒有效期6个月，开封后试剂1个月内用完，保证检测活性

显色系统：TMB双组分显色系统，酸性终止液终止显色反应，显色梯度清晰稳定

检测波长：酶标仪450nm单波长检测，参考波长630nm，消除孔板背景误差

标准曲线绘制：采用6个梯度标准品浓度稀释，以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，拟合四参数逻辑曲线，R²≥0.995

特异性：仅特异性结合大鼠DAT蛋白，与大鼠其他转运蛋白、同源亚型蛋白无交叉反应，特异性准确率100%

重复性：板内变异系数CV≤4%，板间变异系数CV≤6%，批次检测重复性良好

注意事项：实验样本需避免反复冻融，全程低温操作；温育过程需避光、密封，防止孔内液体挥发；洗涤步骤需彻底，避免残留洗液影响显色结果；标准品稀释需现配现用，不可留存复用。
关键注意事项：

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异

所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）

避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用

洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果

显色过程需避光，避免阳光直射影响结果
实验步骤如下：

试剂盒试剂室温平衡 27min，浓缩洗涤液 1:23 稀释，大鼠突触体裂解上清全程低温避光。

酶标板每孔添加 100μL DAT 重组标准品、突触上清、空白稀释液。

酶标记特异性抗体 100μL / 孔，封板 37℃孵育 79min。

洗涤浸泡 43s，洗涤 5 次，彻底吸干微孔。

避光显色底物 100μL，37℃避光显色 18min。

滴加终止液充分混匀微孔。

酶标仪读取 OD450，定量多巴胺转运蛋白 DAT 含量。
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