大鼠β细胞素(BTC)ELISA试剂盒

双抗体夹心酶联免疫吸附原理，固相微孔板预包被抗大鼠 BTC 捕获抗体，样本分泌 BTC 结合固定抗体，洗涤后加入酶标记抗 BTC 检测抗体构建夹心免疫复合物，底物显色读取 OD 值，对照标准曲线定量 BTC 浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤0.1ng/mL

检测范围：0.2ng/mL - 8ng/mL

反应时间：全程孵育反应120分钟

保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后试剂密封2-8℃存放

有效期：未开封原装试剂盒有效期6个月

显色系统：TMB双组分显色系统，底物液A、B混合显色

检测波长：450nm主波长，630nm参比波长

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制四参数拟合标准曲线，计算样本浓度

特异性：仅特异性识别大鼠BTC，与大鼠其他同源细胞因子无交叉反应，与小鼠、兔等异种物种BTC无明显交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%，重复性良好

注意事项：1. 试剂使用前需恢复室温，充分混匀，避免气泡产生；2. 洗板需彻底，避免残留洗液影响显色结果；3. 显色反应需避光进行，严格控制反应时间；4. 样本避免反复冻融，否则易导致蛋白降解影响检测结果。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温复温 25min，20× 洗涤液蒸馏水稀释，底物避光存放。

标准品稀释：BTC 冻干标准品溶解配置 6 个浓度梯度，双复孔检测。

样本上样：标准孔 50μL 梯度标准液，细胞培养上清、组织匀浆 50μL 上样。

酶结合物孵育：每孔 50μL HRP 标记 BTC 抗体，封膜 37℃避光孵育 63min。

洗板：洗涤液浸泡 33s，拍干，循环洗板 5 次。

显色：TMB 底物各 50μL，避光 37℃孵育 16min。

终止检测：终止液混匀，7min 内 450nm 读数，换算 BTC 含量。