大鼠β-防御素(β-DF)ELISA试剂盒

双抗体夹心酶联免疫吸附法，微孔板包被抗大鼠 β-DF 捕获抗体，样本分泌型 β 防御素结合固相抗体，洗板后加入 HRP 标记抗 β-DF 检测抗体形成夹心复合物，底物显色读取吸光度，标准曲线定量 β-DF 表达水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤1.2pg/mL

检测范围：3pg/mL - 900pg/mL

反应时间：总反应时长150分钟（60分钟温育+30分钟二抗结合+30分钟显色）

保存条件：2-8℃避光冷藏，抗菌肽试剂低温防潮保存

有效期：原装未拆封12个月

显色系统：HRP-TMB稳定显色体系

检测波长：450nm

标准曲线绘制：梯度标准品OD值拟合四参数曲线，计算β-DF浓度

特异性：特异性识别大鼠β-防御素，与α-防御素无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：黏膜组织、血清样本无菌采集，避免细菌污染；温育条件恒定，保证抗原抗体结合稳定。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温平衡 23min，20 倍洗涤液稀释混匀，拆分酶标板。

标准品稀释：β-DF 冻干标准品溶解配置 6 个梯度，设置空白零孔。

样本上样：标准孔 50μL 标准液，气道黏膜匀浆、细胞上清 50μL 上样。

孵育反应：每孔 50μL HRP 标记 β-DF 抗体，封膜 37℃避光孵育 62min。

洗板：洗涤液浸泡 32s，拍干，洗板 5 次。

显色：TMB 底物各 50μL，避光 37℃反应 15min。

终止检测：终止液混匀，7min 内 450nm 读数，计算 β 防御素浓度。