大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法，将大鼠FⅧAg特异性抗体包被于酶标板微孔，加入标准品和待测大鼠血浆样本，样本中的FⅧAg抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合反应物，加入酶标记的FⅧAg检测抗体，形成稳定的夹心免疫结构，再次洗板后加入TMB底物进行酶促显色，终止后测定OD值，显色强度与FⅧAg含量成正比，通过标准曲线计算样本浓度。
基本参数‌：

产品名称：大鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒

英文名称：FⅧAg ELISA Kit
货号：Y-E1326

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度≤1.5ng/mL

检测范围：3.0ng/mL - 120ng/mL

反应时间：总反应时长100分钟（免疫结合70分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光保存，凝血因子相关试剂严禁冷冻

有效期：未开封12个月，开封后1个月内用完

显色系统：适配凝血因子检测的高灵敏度TMB显色体系

检测波长：450nm单波长定量检测

标准曲线绘制：四参数拟合标准曲线，覆盖临床样本浓度区间

特异性：特异性结合大鼠FⅧAg，与其他凝血因子无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤10%

注意事项：血浆样本需抗凝处理，避免凝血激活导致抗原降解；样本避免反复冻融。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 31min，洗涤缓冲液 1:23 稀释，大鼠抗凝血浆避免凝血、溶血。

微孔板设置梯度 FⅧAg 标准孔、血浆样本孔、空白孔，每孔 100μL 液体。

一步法酶抗体液 100μL / 孔，避光 37℃孵育 70min。

洗涤浸泡 36s，洗 4 次，拍干微孔残留洗液。

避光显色底物 100μL，37℃显色 16min。

终止液 50μL 中和显色，摇匀。

450nm 检测 OD，计算大鼠血浆 FⅧAg 含量。
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