大鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附原理，酶标板包被纯化的大鼠PP特异性捕获抗体，加入不同浓度标准品及待测大鼠样本，样本中的PP抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，洗板去除未结合反应物，加入辣根过氧化物酶标记的PP检测抗体，形成稳定免疫复合物，洗涤后加入底物显色液进行显色，终止反应后检测吸光度值，依据标准曲线定量测定大鼠样本中PP的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA试剂盒

英文名称：PP ELISA Kit
货号：Y-E1136

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度≤0.6ng/mL

检测范围：1.2ng/mL - 45ng/mL

反应时间：总反应时长105分钟（温育75分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃密封避光保存，避免试剂氧化失效

有效期：原装试剂盒12个月有效期

显色系统：专属酶促TMB显色系统，适配磷酸酶蛋白检测

检测波长：450nm单波长定量检测

标准曲线绘制：梯度标准品浓度与OD值拟合四参数标准曲线

特异性：特异性检测大鼠蛋白磷酸酶，无其他磷酸酶交叉干扰

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%

注意事项：样本裂解后需立即检测，磷酸酶易失活；洗涤步骤需轻柔，避免破坏微孔包被层。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒组分室温平衡 32min，浓缩洗涤液 1:25 稀释，大鼠组织裂解液全程冰上操作。

各微孔添加 100μL PP 标准品、组织裂解上清、空白稀释液。

酶标记捕获抗体 100μL 每孔，覆膜 37℃孵育 75min。

洗涤浸泡 45s，洗 5 轮，吸干微孔残留液体。

避光显色底物 100μL，室温避光显色 21min。

终止液终止免疫显色反应，轻摇混匀。

酶标仪读取 OD450，计算蛋白磷酸酶 PP 浓度。
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