大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测技术，预先将大鼠PKB特异性单克隆抗体包被于酶标板微孔中，加入标准品和待测大鼠组织、细胞样本，样本中的PKB抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除杂质后加入酶标记的PKB多克隆抗体，形成特异性免疫夹心复合物，经充分洗涤后加入TMB底物显色，显色强度与样本中PKB含量呈正相关，终止反应后通过酶标仪读数，结合标准曲线实现精准定量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒

英文名称：PKB ELISA Kit
货号：Y-E1315

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测灵敏度≤0.8ng/mL

检测范围：1.5ng/mL - 50ng/mL

反应时间：总反应时长110分钟（抗体孵育80分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光保存，激酶抗体组分严禁高温

有效期：未开封12个月，开封后密封保存30天

显色系统：高稳定性TMB显色体系，适配激酶蛋白检测

检测波长：450nm/630nm双波长校正

标准曲线绘制：四参数Logistic回归拟合标准曲线，R²≥0.990

特异性：特异性结合大鼠PKB，与其他蛋白激酶无交叉识别

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：组织样本需充分裂解、离心取上清，杂质会干扰结合反应；全程低温操作，防止激酶失活。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒 4℃试剂提前 30min 取出复温，洗涤液 1:20 稀释，大鼠细胞裂解上清低温保存。

酶标板分孔加入 100μL 梯度 PKB 标准蛋白、细胞上清、空白液。

一步混合酶抗体液 100μL / 孔，密封 37℃孵育 90min。

洗涤液浸泡 35s，洗涤 5 次，彻底拍干微孔。

避光 TMB 显色液 100μL，37℃避光显色 16min。

滴加终止液充分混匀。

450nm 检测 OD 值，定量样本 PKB 激酶含量。
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