大鼠P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒

双抗体夹心 ELISA 体系，微孔板固定抗大鼠 SP-R 捕获抗体，样本中的 SP-R 膜蛋白 / 可溶性受体与包被抗体特异性结合，洗板后加入酶标记抗 SP-R 检测抗体形成夹心复合物，底物催化显色，依据 OD 值对照标准曲线实现 SP-R 蛋白定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤2.5pg/mL

检测范围：6pg/mL - 2000pg/mL

反应时间：总反应时长180分钟（样本温育90分钟+二抗温育30分钟+显色30分钟）

保存条件：试剂盒整体2-8℃避光冷藏，严禁冷冻结冰，开封后密封防潮保存

有效期：未拆封原装试剂盒12个月

显色系统：TMB底物显色，硫酸终止液终止显色反应

检测波长：450nm（主波长），630nm（参比波长）

标准曲线绘制：梯度稀释标准品，检测各浓度OD值，四参数Logistic拟合曲线，计算样本受体含量

特异性：特异性识别大鼠SP-R蛋白，与其他神经递质受体无交叉结合反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：组织膜蛋白样本提取需彻底，去除胞质杂质；实验过程避免孔壁触碰，防止包被抗体脱落；试剂平衡室温后再使用。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温复温 28min，20× 洗涤液稀释；样本稀释液、酶结合物常温放置，禁止低温直接使用。

标准品稀释：SP-R 冻干标准品充分溶解后梯度稀释，配置 6 组有效浓度，设置空白零孔。

样本加样：标准孔 50μL 梯度标准品，组织膜蛋白匀浆样本 50μL 上样，空白孔添加稀释液。

共孵育反应：每孔加入 50μL HRP 标记抗 SP-R 抗体，封膜，37℃避光孵育 62min。

洗板步骤：倒掉孔内液体，洗涤液浸泡 32s，彻底拍干，循环洗板 5 次。

避光显色：TMB 底物 A、B 各 50μL 加入各孔，37℃避光孵育 16min。

终止检测：终止液 50μL 混匀，6min 内 450nm 检测 OD 值，换算样本 SP-R 浓度。