大鼠P53(P53)ELISA试剂盒

双抗体夹心 ELISA 法，固相载体包被抗大鼠 P53 单克隆捕获抗体，样本中的 P53 蛋白特异性结合固定抗体，洗涤除去非特异性结合杂质，再加入辣根过氧化物酶标记的抗 P53 检测抗体构建夹心免疫复合物，TMB 底物显色，酶标仪读取 OD 值，通过标准曲线换算得到样本 P53 蛋白定量浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤2.0pg/mL

检测范围：5pg/mL - 1500pg/mL

反应时间：总反应时长180分钟（样本温育90分钟+洗板+二抗温育30分钟+显色30分钟+终止读数）

保存条件：试剂盒2-8℃避光冷藏，禁止冷冻；抗体组分需单独密封保存，避免光照失活

有效期：未开封试剂盒12个月

显色系统：TMB底物显色体系，酸性终止液终止反应

检测波长：450nm，推荐600nm作为参比波长校准误差

标准曲线绘制：采用梯度标准品浓度对应的OD均值，四参数Logistic回归拟合标准曲线，精准计算样本P53含量

特异性：特异性识别大鼠P53蛋白，与大鼠P21、P16等同源抑癌蛋白无交叉反应

重复性：板内变异系数≤6%，板间变异系数≤8%

注意事项：组织样本需充分匀浆、离心去除杂质，避免蛋白沉淀干扰检测；全程避免高温、强光环境；洗板力度均匀，避免孔底残留液体影响实验结果。
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒置于室温平衡 20min，20 倍浓缩洗涤液蒸馏水稀释；酶标板按需拆分，未使用孔条密封冷藏。

标准品制备：P53 冻干标准品溶解后梯度稀释，设置零浓度空白标准孔，所有标准品现配现用不可隔夜保存。

样本上样：标准孔添加 50μL 梯度标准溶液，组织 / 细胞上清样本 50μL 加入对应检测孔，空白孔添加样本稀释液 50μL。

酶结合物孵育：全部检测孔加入 50μL HRP 标记 P53 抗体，封板膜密封，37℃恒温避光孵育 60min。

洗板处理：去除孔中液体，洗涤液填满每孔浸泡 25s，拍干，重复洗板 5 次，彻底去除未结合游离抗体。

底物显色：每孔加 TMB A、B 液各 50μL，避光 37℃孵育 18min，低浓度标准孔浅蓝色、高浓度深蓝色。

终止检测：加终止液 50μL 摇匀，8min 内 450nm 测 OD 值，标准曲线拟合计算样本 P53 蛋白表达量。