大鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒

双抗体夹心 ELISA，板底包被抗 L-Selectin 捕获抗体，样本白细胞黏附分子 L 选择素结合固相抗体，酶标记二抗形成夹心结构，洗板显色读数，定量淋巴细胞活化、迁移标志物 L-Selectin。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度0.07ng/mL，适配大鼠微量L选择素精准检测

检测范围：0.1ng/mL - 90ng/mL，覆盖大鼠免疫黏附、炎症反应相关样本浓度

反应时间：总实验时长125分钟，样本孵育65分钟，酶孵育30分钟，显色15分钟，终止5分钟

保存条件：2 - 8℃避光冷藏保存，洗涤液室温密封存放，板条开封后密封防潮

有效期：未开封有效期6个月，开封后1个月内用完所有试剂

显色系统：稳定型TMB显色系统，显色均匀、无杂色背景

检测波长：450nm检测波长，630nm参考校正波长

标准曲线绘制：6点梯度标准品，四参数拟合曲线，R²≥0.995

特异性：特异性结合大鼠L-Selectin，与E、P选择素无交叉反应

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%，数据偏差小、稳定性高

注意事项：抗凝样本优先选用EDTA抗凝，避免肝素干扰抗原结合；样本避免久置、反复冻融；显色终止后15分钟内完成上机检测
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒室温平衡 24min，20× 洗涤液稀释，外周血淋巴细胞上清回暖。

标准品稀释：L-Selectin 冻干标准品复溶梯度稀释 6 组浓度，空白对照孔。

加样孵育：50μL 标准品 / 样本 + 50μL 酶标记抗体，封膜 37℃避光孵育 60min。

洗板操作：洗涤液浸泡 30s，拍干残液，洗板 5 次。

底物显色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 15min。

终止读数：终止液混匀，10min 内酶标仪读数。

数据计算：定量淋巴细胞 L 选择素，评价免疫细胞黏附迁移。