大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，将高特异性抗大鼠CFH抗体包被于酶标板微孔内，构建固相免疫反应载体，样本中的CFH抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除杂质后加入酶标记检测抗体，形成夹心免疫复合物，酶促底物显色后，显色强度与CFH浓度正相关，终止反应后上机检测，通过标准曲线完成定量检测。
基本参数‌：

产品名称：大鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒

英文名称：CFH ELISA Kit
货号：Y-E1171

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测值0.12ng/mL，可精准检测大鼠体内低丰度CFH蛋白表达量。

检测范围：0.5ng/mL - 12ng/mL，适用于大鼠血清、肝脏组织、细胞培养上清样本检测。

反应时间：总实验时长110分钟，一抗孵育40min、二抗孵育30min、显色反应25min、终止读数5min。

保存条件：试剂盒2 - 8℃密封避光保存，酶标板拆封后剩余孔板需用封口膜密封，防止干燥失效。

有效期：未开封有效期6个月，开封后试剂2周内使用最佳，最长不超过1个月。

显色系统：优化型TMB底物显色系统，显色响应快，颜色梯度区分度高。

检测波长：检测主波长450nm，参比波长620nm，有效消除微孔板透光误差。

标准曲线绘制：采用六梯度标准品稀释，四参数Logistic拟合曲线，相关系数R²≥0.995。

特异性：特异性识别大鼠CFH蛋白，与补体家族其他因子、凝血因子无交叉反应，特异性极强。

重复性：板内变异系数≤4%，板间变异系数≤6%，重复实验数据一致性好。

注意事项：样本采集后需低温离心处理，去除杂质沉淀；所有耗材需无热源、无内毒素；显色时间需严格统一，避免不同孔显色时长不一致导致数据偏差。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

CFH 冻干标准品复溶梯度稀释，试剂盒室温平衡 30min，标记酶标板孔位；

各微孔加入 50μL 梯度标准品或大鼠血清样本，空白孔填充稀释缓冲液；

加入 100μL HRP 标记抗 CFH 抗体，封板膜密封板面；

37℃避光孵育 60min，一步形成抗原酶标抗体复合物；

洗板液浸泡微孔 40s，彻底拍干，重复洗涤 6 次；

避光添加显色底物混合液 100μL，37℃避光显色 15min；

终止液混匀，450nm 检测 OD 值，换算 CFH 表达量。
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