大鼠补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板预先固定抗大鼠C5a特异性捕获抗体，加入待测样本和梯度标准品，样本中的C5a抗原被固相抗体特异性捕获，洗板净化反应体系，加入HRP标记的C5a检测抗体形成三元免疫复合物，经底物显色、终止反应后，检测吸光度数值，对照标准曲线精准测定大鼠样本中C5a的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒

英文名称：C5a ELISA Kit
货号：Y-E1284

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出限0.08ng/mL，能够精准捕捉大鼠低表达水平的C5a炎症因子。

检测范围：0.2ng/mL - 10ng/mL，适配大鼠血清、腹水、组织裂解液中C5a含量检测。

反应时间：总反应时长100分钟，样本孵育35min、酶结合物孵育30min、显色20min、终止读数5min。

保存条件：全套试剂2 - 8℃避光冷藏，浓缩洗涤液低温易结晶，使用前可温水轻微融化，禁止高温加热。

有效期：原装未开封有效期6个月，反复冻融、室温放置会大幅缩短试剂有效期。

显色系统：高灵敏度TMB显色体系，显色梯度均匀，高浓度样本无饱和显色现象。

检测波长：450nm单波长主检测，可搭配600nm参比波长校正背景误差。

标准曲线绘制：梯度稀释标准品，以浓度-OD值拟合四参数曲线，R²≥0.994，线性拟合度优异。

特异性：仅特异性结合大鼠C5a抗原，与补体C3a、CFH及其他炎症因子无交叉反应，特异性纯度高。

重复性：板内CV≤3.5%，板间CV≤5.5%，批次间检测数据稳定性强。

注意事项：洗涤过程需充分洗板，避免残留洗液导致背景偏高；标准品需现配现用，稀释后不可留存次日使用；孵育温度严格控制在37℃，温度偏差会影响抗原抗体结合效率。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

C5a 标准品稀释梯度配制，试剂盒室温平衡 29min，划分酶标板标准、样本、空白孔；

标准孔加 50μL 标准品，样本孔加入大鼠血浆 50μL，空白孔补稀释液；

全部微孔加入 100μL 酶标记抗 C5a 特异性抗体，密封酶标板；

37℃恒温孵育 64min，一步同步共孵育抗原抗体结合；

洗涤液浸泡微孔 35s，吸干残留液体，洗板 5 次；

避光加入显色底物 A、B 各 50μL，37℃避光反应 14min；

终止液终止显色，450nm 读数，计算 C5a 浓度。
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