兔原代细胞 新品

产品基本信息

标准培养条件

1. 基础培养基：专用兔原代细胞完全培养基

2. 血清含量：10%~15% 特级胎牛血清

3. 添加成分：青霉素 - 链霉素双抗、L - 谷氨酰胺、细胞生长专用添加剂

4. 培养环境：37℃恒温、5% CO₂、饱和湿度细胞培养箱

5. 培养器皿：部分细胞需明胶 / 多聚赖氨酸 / 胶原包被培养瓶、培养板

原代取材分离流程

1. 无菌处死实验兔，75% 医用酒精全身体表消毒

2. 无菌超净台内快速剥离目标组织，预冷无菌 PBS 冲洗去除淤血、脂肪、结缔组织

3. 剔除无关组织，将组织剪碎至 1mm³ 细小组织块

4. 加入对应消化液：胶原酶 Ⅰ/Ⅱ/Ⅳ、0.25% 胰蛋白酶，37℃水浴恒温消化

5. 血清终止消化，细胞筛过滤去除组织残渣

6. 低速离心弃上清，完全培养基重悬细胞，计数后接种培养

7. 培养 24h 首次换液，去除死细胞与未贴壁杂质

细胞传代操作

1. 细胞汇合度达 70%~80% 即可传代，严禁长满融合

2. 弃尽旧培养基，无菌 PBS 清洗细胞 2 次

3. 加入胰酶消化液，37℃短时消化，镜下观察细胞回缩变圆立即终止

4. 加入完全培养基吹打制备单细胞悬液

5. 低速离心收集细胞，重悬后按 1:2~1:3 比例分瓶接种

6. 补足培养基，放入培养箱常规培养

   注意：兔原代细胞不耐多次消化，尽量少传代，优先 P0、P1 代做实验

细胞冻存方法

1. 选取对数生长期活力良好细胞，常规消化离心收集

2. 配制冻存液：90% 完全培养基 + 10% DMSO

3. 调整细胞浓度为 5×10⁵~1×10⁶个 /mL，分装冻存管

4. 梯度降温：4℃30min→-20℃1h→-80℃过夜

5. 次日转移至液氮罐中长期密封保存

细胞复苏流程

1. 取出冻存细胞，37℃恒温水浴快速摇晃融化，1min 内完全解冻

2. 酒精擦拭冻存管外壁灭菌，移入超净工作台

3. 细胞悬液加入足量完全培养基稀释，降低 DMSO 毒性

4. 离心弃上清，更换新鲜完全培养基重悬细胞

5. 均匀接种至培养瓶，静置培养，24h 更换新鲜培养基

质量鉴定标准

1. 形态鉴定：符合兔源细胞典型形态特征，无畸形大量凋亡细胞

2. 免疫标志物鉴定：特异性抗原染色阳性，判定细胞分型

3. 功能鉴定：具备对应组织细胞生理活性与应答功能

4. 微生物检测：连续培养 7d 无浑浊、无菌丝、无支原体阳性反应

实验注意事项

1. 全程严格无菌操作，兔原代细胞抵抗力弱，极易发生污染

2. 严控消化时间与消化酶浓度，避免细胞过度损伤死亡

3. 更换培养基遵循少量多次原则，避免营养骤变影响生长

4. 避免低温、温差波动，稳定培养环境

5. 幼兔取材细胞活性远高于成年兔，优先选用幼兔分离

6. 严禁用于人体临床注射，仅用于体外科研实验