荧光探针PCR 新品

荧光探针PCR‌即基于荧光探针的实时荧光定量PCR（qPCR），是一种通过特异性荧光探针在PCR扩增过程中实时监测目标核酸序列的技术，具有‌高特异性‌和‌高灵敏度‌。

常用的荧光探针法包括：

‌TaqMan探针法‌：最广泛应用，适用于基因表达分析、病原体检测等。

‌分子信标法‌：形成发夹结构，特异性更强，适合SNP检测。

‌TaqMan-MGB探针‌：结合小沟结合物，提升熔解温度和特异性，适用于复杂样本分析。

实验步骤：

一、样品RNA提取

‌样本类型‌：血液、粪便、病灶渗出物或培养物。

‌提取方法‌：

使用商业化病毒RNA提取试剂盒（如柱式法）或本试剂盒配套的DNA抽提液进行粗提。

对血液样本，先分离外周血淋巴细胞，再提取RNA。

设置‌样品制备阳性对照（PC）‌ 和 ‌阴性对照（NC）‌，分别使用已知阳性核酸片段和水作为对照。

二、标准曲线稀释（用于定量分析）

使用试剂盒提供的高浓度阳性对照（如1×10⁸ 拷贝/μL），在独立区域用荧光RT-PCR专用模板稀释液进行10倍梯度稀释，制备10²–10⁷ 拷贝/μL的6个标准品。

稀释过程需更换枪头，防止交叉污染，所有操作置于冰上待用。

三、PCR反应体系配制（20 μL体系）

成分                                                                              加入量

探针法qRT-PCR缓冲液                                                10 μL

探针法qRT-PCR酶混合液                                             1 μL

引物-探针混合液（针对HTLV-1保守区如LTR或env）   3 μL

待测RNA模板或标准品                                                 6 μL

超纯水                                                                      补足至20 μL
四、qPCR扩增程序

步骤                   温度                时间                   循环数

逆转录                50℃              10 min                   1

预变性                95℃              10 min                   1

PCR扩增             95℃              15 sec                    40

                           60℃           60 sec（采集FAM荧光信号）
五、结果判定

‌有效性判断‌：

阴性对照无扩增曲线；

阳性对照Ct值 ≤ 35，否则实验无效。

‌结果解读‌：

Ct值 ≤ 35：‌阳性‌，提示HTLV-1核酸存在；

Ct值 > 40：‌阴性‌；

35 < Ct值 ≤ 40：‌可疑‌，建议复检。

公司正在出售的产品：