12脂氧合酶抗体
原理特点：
12脂氧合酶抗体的特异性是检测准确性的基础：该抗体针对ALOX12的特定肽段区段制备，只会特异性结合ALOX12蛋白，和其他同源蛋白几乎无交叉反应，保证了检测结果的可靠性。
英文名称:ALOX12 Rabbit pAb
中文名称:12脂氧合酶抗体
英文别名:12-LOX; 12S-LOX; LOG12; LOX12_HUMAN; ALOX12; Arachidonate (12S)-lipoxygenase
(12S-LOX | 12S-lipoxygenase); Arachidonate (15S)-lipoxygenase; Linoleate (13S)-lipoxygenase;
Lipoxin synthase 12-LO; Platelet-type lipoxygenase 12; 1.13.11.-; 12LO; arachidonate 12-lipoxygenase
, 12R type; 12R-lipoxygenase
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
交叉反应:Human, Mouse (predicted: Rat)
抗体来源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human 12 Lipoxygenase : 101-200/663
亚型:IgG
性状:Liquid
纯化方法:affinity purified by Protein A
克隆类型:Polyclonal
理论分子量:76 kDa
检测分子量:76 kDa
浓度:1mg/ml
储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存条件:Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic
or diagnostic applications.
检测原理:
1. Western Blot（免疫印迹，检测蛋白表达/分子量）
先通过SDS-PAGE电泳按分子量大小分离样本中的总蛋白，再将蛋白转印到固相薄膜（PVDF/NC膜）上；之后
加入12脂氧合酶抗体，抗体特异性识别并结合膜上的ALOX12蛋白；最后加入带HRP/荧光标记的二抗结合一抗
，通过发光或荧光信号显影，即可确定ALOX12的表达量和分子量大小。
2. ELISA（酶联免疫吸附实验，定量蛋白浓度）
主流采用双抗体夹心法，先将12脂氧合酶的捕获抗体预包被在酶标板上，加入样本后ALOX12会与固相捕获抗
体结合；再加入生物素标记的检测抗体，形成「捕获抗体-ALOX12-检测抗体」的三元复合物；随后加入HRP
标记的亲和素，通过生物素-亲和素的特异性结合放大信号，加入TMB底物后HRP会催化显色，颜色深浅与样
本中ALOX12的浓度正相关，通过酶标仪读数即可计算出样本中ALOX12的浓度。
3. 免疫组化（IHC）/免疫荧光（IF）
这两种方法用于检测ALOX12在组织或细胞中的定位表达：12脂氧合酶抗体特异性结合组织切片/细胞中的
ALOX12蛋白，免疫组化会通过带酶标记的二抗催化底物显色，免疫荧光则通过带荧光标记的二抗结合，最后
在显微镜下观察ALOX12的分布位置和表达水平。
操作流程：
这是检测12脂氧合酶蛋白表达最常用的方法，标准操作步骤如下：
1、蛋白样本制备：全程冰上操作，细胞/组织样本使用添加了蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液提取总蛋白，
4℃下12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量后备用。
2、电泳转膜：根据12脂氧合酶约76kDa的分子量，选择10%分离胶进行SDS-PAGE电泳；电泳完成后转至PVDF
膜（需甲醇活化），湿转100V恒压60-90分钟。
3、封闭孵育：常规检测用5%脱脂奶粉室温封闭1小时；若检测磷酸化修饰的12脂氧合酶，必须使用BSA封闭避免
磷酸酶干扰。随后加入12脂氧合酶一抗（推荐稀释比1:500-1:1000），4℃孵育过夜。
4、显影检测：TBST洗膜3次，每次5分钟，加入HRP标记二抗室温孵育1小时，再次洗膜后使用ECL发光液显影成
像。
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