空肠弯曲杆菌探针法qPCR试剂盒

空肠弯曲杆菌探针法qPCR试剂盒(不含内参) 

产品及特点     
空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni）菌体轻度弯曲，似逗点状，长1.5～5 μm，宽0.2～0.8 μm。菌体一端或两端有单鞭毛，无荚膜，不形成芽胞。空肠弯曲杆菌是一种人畜共患病病原菌，可以引起人和多种动物（如牛、羊、狗及禽类）发生多种疾病，并且是一种食物源性病原菌。空肠弯曲杆菌感染人后，其分泌的内毒素能侵袭小肠和大肠粘膜，引起急性肠炎，亦可引起腹泻的暴发流行或集体食物中毒。另外，空肠弯曲杆菌有时可通过肠粘膜进入血液，引起败血症和其他脏器感染，如脑膜炎、关节炎、肾盂肾炎等。由于空肠弯曲杆菌对人群普遍易感，因此快速检测空肠弯曲杆菌对人类健康具有重要的意义。本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的专门检测空肠弯曲杆菌的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/mL。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物是根据空肠弯曲杆菌DNA高度保守区设计，不会跟其他的DNA发生交叉反应。

5. 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品足够50次20 mL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品只能用于科研。
规格及成分

稀释标准曲线样品

（以10E1-10E6拷贝/ mL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。

1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。

2. 用带芯枪头分别加入45 mL荧光PCR专用模板稀释液，用带芯枪头，下同。

3. 在6号管中加入5 mL 1×10E7拷贝/mL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/mL的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在5号管中加入5 mL 1×10E6拷贝/mL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/mL的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在4号管中加入5 mL 1×10E5拷贝/mL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E4拷贝/mL的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样品DNA的制备

7. 如果有N个样品，设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10 mL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。

8. 用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
数据处理

1. 如果样本制备阳性对照或PCR阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。

2. 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。

3. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。

4. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须无Ct或Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40，否则实验无效。如果实验有效，则分析待测样品，如果无Ct或Ct大于或等于40，则为阴性。如果Ct小于40则为阳性。
自备试剂
样品DNA。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年。