土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性检测试剂盒 新品

土壤碱性磷酸酶（soilalkalinephosphatase，S-AKP/ALP）活性测定试剂

盒

微量法100T/96S

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转

化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效

磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理：

碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过苯酚与2,6-二溴苯醌氯

亚胺在碱性条件下显色，于660nm波长测定显色产物吸光度并结合苯酚标准品定量酚的生成量，即可计

算出S-AKP/ALP活性。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。（变

褐色后不能再使用）。

标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。

需自备仪器和用品：

酶标仪、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、96孔板、冰、蒸馏水、无水乙醇

和甲苯。

操作步骤：

一、催化反应

称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置

于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的

反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、显色反应

1.酶标仪预热30min，调节波长到660nm。

试剂名称（μL）空白管标准管测定管

蒸馏水10--

标准品-10-

上清液--10

试剂三202020

试剂四444

充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30min，于660nm测定吸光度，空白管和标准

管只需测定一次。

酶活性计算公式：

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1μmol酚为1个酶活单位。

S-AKP/ALP（μmol/d/g土样）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W÷T

=0.725×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W

C标准液：0.5μmol/mL；V总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24

h=1d。

注意事项：

1.本法中，ΔA的范围为0.01~1.0，若小于0.01，可增加样本质量或适当延长反应时间；若大于1.0，

高于可使用蒸馏水对上清液进行稀释，最终计算结果需同步修改。

2.当催化反应所得上清液中苯酚生成浓度高于1mM时，需对上清液进行适当稀释；若浓度过高，

显色反应将无法完全进行，导致蓝色变浅甚至不显色，影响定量准确性。