IFN-γ ELISPOT试剂盒-ACROBiosystems百普赛斯

Mouse Interferon-γ (IFN-γ) ELISPOT Kit

组分（Materials Provided）

产品概述（Product Overview）

干扰素-γ（IFN-γ）是唯一的II型干扰素。这种促炎性细胞因子由活化的T细胞和NK细胞分泌，能够激活巨噬细胞和内皮细胞，并通过影响抗原呈递细胞、T细胞和B细胞来调节免疫应答。辅助T细胞和细胞毒性T细胞产生IFN-γ是Th1型表型的标志。因此，高水平产生IFN-γ通常与宿主针对细胞内病原体的有效防御相关。小鼠IFN-γ ELISpot检测试剂盒旨在用于单细胞水平检测分泌小鼠IFN-γ的细胞，并可定量分析小鼠IFN-γ分泌细胞的频率。ELISpot检测具有高度可重复性和灵敏性，能够检测频率低于十万分之一的应答，且无需事先对T细胞进行体外扩增，仅使用少量原代细胞即可适用于高通量分析。因此，ELISpot检测是疫苗开发、细胞因子分泌研究以及各类临床试验监测中的有用工具。

应用说明（Application）

该试剂盒用于在细胞水平检测IFN-γ。

仅限科研使用。

存储（Storage）

未开封的试剂盒应在收到后于2℃至8℃条件下储存。

有效期见外包装，请勿使用超过有效期的试剂。

开封后的试剂盒应按照组分表储存，有效期自开封之日起为30天。

原理（Assay Principles）

ELISpot检测采用定量夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）技术。该试剂盒包含预包被抗IFN-γ抗体的微孔板、阳性刺激物、生物素标记的抗IFN-γ抗体、链霉亲和素-HRP、AEC底物及各种缓冲液。

您的实验将包括以下6个简单步骤：

a) 特异性针对小鼠IFN-γ的单克隆抗体已预先包被在聚偏二氟乙烯（PVDF）膜底的微孔板上。

b) 将经过适当刺激的细胞加入孔中，并将微孔板置于37°C、湿润的CO2培养箱中孵育指定时间。在此孵育期间，分泌细胞附近固定的抗体结合了所分泌的IFN-γ。

c) 洗去细胞和未结合的物质后，加入生物素标记的小鼠IFN-γ特异性抗体。洗涤去除未结合的生物素化抗体后，再加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的链霉亲和素。

d) 洗涤孔板，加入用稀释缓冲液稀释后的链霉亲和素-HRP。

e) 洗涤孔板，加入AEC底物。在细胞因子定位的位置会形成红棕色沉淀，呈现为斑点，每个斑点代表一个分泌IFN-γ的细胞。

f) 斑点可使用自动化ELISpot读数系统进行计数，或使用体视显微镜手动计数。