热稳定无机焦磷酸酶 新品

基本信息‌

‌中文名称‌：热稳定无机焦磷酸酶

货号：P-PR1397

规格：200U、2000U

‌英文名称‌：Thermostable Inorganic Pyrophosphatase
作用机制：高温条件下仍保持活性，催化无机焦磷酸水解为正磷酸，破坏焦磷酸的抑制作用，驱动核酸合成（如PCR、DNA测序）、蛋白翻译等不可逆反应高效进行；减少副产物积累，提高反应的特异性与产物产量。 

适用样本：高温PCR反应、DNA测序反应、体外酶促合成体系
产品概述

热稳定无机焦磷酸酶可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐，能增强DNA复制等分子生物学过程。

产品组成

主要成分为热稳定的无机焦磷酸酶，无其他额外复杂添加成分。

产品特点

·热稳定性极佳：100℃加热4小时，该酶仍具有100%活性。

·活性定义精准：1单位指在标准反应条件下（0.5mL反应体系，50mM Tricine（pH8.5），1mM MgCl2和

0.32mM PPi，75℃反应10分钟），每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol磷酸盐的酶量。

·功能高效：能有效增强DNA复制，提高相关分子生物学实验的效率。

操作步骤

.获得目的基因

·PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，设计带有不同酶切位点的上下游引物，进行PCR循环得到所需基因片段。

·RT - PCR方法：用TRIzol法提取总RNA，逆转录得到cDNA第一链，再以此为模板进行PCR获得产物。

.构建重组表达载体

·对表达质粒和PCR产物分别进行双酶切，回收载体大片段和酶切后的PCR产物，在T4DNA连接酶作用下将PCR产物连接入载体。

.获得含重组表达质粒的表达菌种

·将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体标志筛选阳性克隆，小量抽提质粒进行双酶切初步鉴定，测序验证正确后转化表达宿主菌感受态细胞。

.诱导表达

·挑取含重组质粒的菌体单斑至含Amp的LB培养基中37℃过夜培养，按比例稀释后培养至OD600达到0.4 - 1.0，加入IPTG诱导剂进行诱导表达，培养一定时间后

收集菌体处理并进行相关分析。

注意事项

·该产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途。

·反应体系中需保证有适量的Mg2+Mg2+以维持酶的活性。

·操作过程中注意无菌操作，避免污染。

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