Taq DNA连接酶

基本信息‌

‌英文名称‌：Taq DNA Ligase
作用机制：一种热稳定的DNA连接酶，在高温条件下催化DNA分子之间的磷酸二酯键形成；可连接具有同源序列的DNA片段，常用于DNA连接酶链式反应（LCR）、基因分型等实验。 

适用样本：DNA片段的连接、基因分型、DNA甲基化检测等实验，尤其适用于高温条件下的连接反应。
产品概述
Taq DNA连接酶是从嗜热细菌Thermus aquaticus（Taq）中分离得到的一种热稳定DNA连接酶，能够在高温条件下催化双链DNA片段末端的磷酸二酯键形成。它可识别并连接带有互补粘性末端的DNA片段，且需要NAD+作为辅助因子。Taq DNA连接酶具有热稳定性，在高温（如94℃）条件下仍保持活性，这一特性使其在聚合酶链式反应（PCR）相关的实验中具有独特应用，如连接酶链式反应（LCR）、实时荧光定量PCR中的探针连接检测、基因分型等。在LCR中，Taq DNA连接酶可在高温循环条件下反复催化互补引物的连接，实现靶序列的扩增与检测。此外，它也可用于常规的DNA连接反应，但相比T4 DNA连接酶，其连接平末端的效率较低。Taq DNA连接酶为高温条件下的DNA连接与分子检测提供了重要的工具。
产品特点
热稳定性极强：耐受94℃高温处理，适合PCR相关的高温循环反应，如连接酶链式反应（LCR）。

NAD+依赖型：以NAD+作为能量辅助因子，而非ATP，适合特定的反应体系需求。

粘性末端偏好：对互补粘性末端的连接效率远高于平末端，连接准确性高。

基因分型利器：在SNP检测、基因突变分析等基因分型实验中具有独特优势。

反应速度快：在65℃条件下连接反应可在数分钟内完成，实验效率高。
操作步骤

一、实验前准备

向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记

载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存

将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用

二、手工提取流程

样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）

洗涤纯化：

取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）

核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸

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注意事项

实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染

蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用

还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效

若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量

提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存

若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱